化浊解毒调肝方对免疫性肝纤维化大鼠MMP-1、TIMP-1表达的影响

摘要

目的：以“浊毒”理论为依据观察化浊解毒调肝方对免疫性肝纤维化大鼠病理形态学及基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)表达的影响，探讨其抗肝纤维化的疗效及作用机理。
　　 方法：选用清洁级Wistar大鼠60只，雄性，体重200±20g。适应性喂养一周后随机分为正常对照组、模型对照组、化浊解毒调肝方大剂量组（简称大剂组）、化浊解毒调肝方中剂量组（简称中剂组）、化浊解毒调肝方小剂量组（简称小剂组）、秋水仙碱治疗组(简称西药组)6组，每组10只。除正常对照组外，其余各组均采用未灭活的猪血清腹腔注射，每次0.5ml/只，每周2次，连续8周。秋水仙碱治疗组和中药治疗组于造模的第8周末给药，每天上午灌胃一次，每次2ml，连续4周。正常对照组和模型对照组给予等量生理盐水。各组分别于治疗的第4周末处死，留取大鼠肝组织，采用苏木精-伊红染色观察肝组织病理形态学的变化。采用免疫组化技术测定肝组织MMP-1、TIMP-1表达情况。所得数据经过整理，采用SPSS13.0统计软件进行检验和方差分析。
　　 结果：
　　 1化浊解毒调肝方对免疫性肝纤维化大鼠体重、肝重、脾重的影响
　　 与正常对照组大鼠比较，模型组、西药治疗组大鼠体重明显降低(P＜0.05)，肝重、脾重明显增加（均P＜0.05）；各剂量中药治疗组大鼠体重、肝重、脾重较正常对照组均无明显改变(均P＞0.05)。与模型组大鼠比较，各剂量中药治疗组大鼠体重明显增加(P＜0.05)，肝重和脾重明显减轻(P＜0.05)。中药大剂量组大鼠体重高于西药治疗组(P＜0.05)。各剂量中药治疗组之间比较无显著性差异(P＞0.05)。
　　 2化浊解毒调肝方对免疫性肝纤维化大鼠病理形态学的影响
　　 正常组肝小叶结构完整，肝细胞围绕中央静脉呈放射状排列，无变性坏死，无纤维组织增生。模型组肝组织病变区域多，面积大，正常肝小叶结构破坏，汇管区扩大有大量炎性细胞浸润，肝细胞肿胀，排列拥挤，见大小不等的空泡，脂肪变性广泛，有部分坏死，汇管区及中央静脉周围纤维组织增生。西药组可见肝小叶结构基本正常，以中央静脉周围肝细胞肿胀变性明显，周边区域较轻，炎细胞浸润、纤维组织增生较模型组明显减轻。大剂组可见肝小叶结构基本正常，肝组织病变区域较少，损伤程度轻，肝细胞排列正常，仅见中央静脉周围肝细胞空泡样变性。中剂组病变区域面积较小剂组小。小剂组肝细胞炎症不显著，可见少量脂肪变性空泡，肝小叶结构基本正常，肝细胞排列尚整齐，中央静脉周围可见部分肝细胞变性，病变区域面积较模型组、西药组小，且肝细胞变性程度轻。
　　 3化浊解毒调肝方对免疫性肝纤维化大鼠肝组织MMP-1表达的影响
　　 MMP-1主要表达在纤维间隔和汇管区的间质细胞，颜色呈棕黄色。其表达强度依次为大剂组、中剂组、小剂组、西药组、模型组，在正常组表达最弱。各药物治疗组与模型组相比差异有统计学意义(P＜0.05)，说明治疗组对MMP-1阳性表达有显著的激活作用；西药组与正常组比较差异有统计学意义(P＜0.05)；大剂组与西药组比较差异有统计学意义(P＜0.05)；大剂组与中、小剂组比较差异不明显(P＞0.05)：因此中药治疗组对MMP-1阳性表达的激活作用优于西药对照组。
　　 4化浊解毒调肝方对免疫性肝纤维化大鼠肝组织TIMP-1表达的影响
　　 TIMP-1表达强度依次为模型组、西药组、大剂组、中剂组、小剂组，在正常组表达最弱。正常组大鼠肝组织见少许TIMP-1阳性表达细胞，模型组大鼠肝组织中表达的阳性细胞比例显著高于正常组，表现为不均匀的黄褐色颗粒状物。与模型组相比，各药物治疗组大鼠肝组织TIMP-1蛋白表达下降，差异有统计学意义(P＜0.05）；西药组与正常组比较差异有统计学意义（P＜0.05）；大剂组与西药组比较差异有统计学意义(P＜0.05）；大剂组与中、小剂组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。因此中药治疗组作用优于西药对照组。
　　 结论：
　　 1化浊解毒调肝方可以改善免疫性肝纤维化大鼠模型的一般状况。
　　 2 HE染色结果显示：化浊解毒调肝方能使HF模型大鼠肝小叶大部分恢复，中央静脉和汇管区纤维组织减少，该方能增强机体的纤维溶解能力，对肝纤维化大鼠有较强的恢复作用。
　　 3化浊解毒调肝方能促进HF模型大鼠MMP-1的表达，同时抑制TIMP-1的表达，通过调节MMPs和TIMPs的失衡，促进异常合成的细胞外基质的降解，减少细胞外基质的过度沉积，而逆转肝纤维化。
　　 4实验结果表明，化浊解毒调肝方对HF的治疗具有较高的临床应用价值，从而为本病的治疗开辟一条新的途径。

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化浊解毒调肝方对免疫性肝纤维化大鼠MMP-1、TIMP-1表达的影响

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综述 中医药抗肝纤维化研究概况

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