CRFR1在神经系统肿瘤表达的研究

摘要

CRF是一种重要的下丘脑神经肽,通过与其受体结合主要调节机体应激状态下的下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴的功能,协调应激状态下内分泌系统、自主神经系统、免疫系统等功能,对心血管、胃肠道、生殖、皮肤等有调节作用。在一些类型的人类恶性肿瘤中也已经发现有CRF及其受体的过度表达,并在一些动物实验模型中证实CRF及其受体的过表达与肿瘤的增殖、转移、血管发生和免疫逃避等有关。
　　 目的:探讨人类神经胶质瘤组织、垂体瘤组织及人类神经胶质瘤细胞株U87中促肾上腺皮质激素释放因子受体1(CRFR1)的表达情况并探讨人类神经胶质瘤中CRFR1的表达与胶质瘤标记物MGMT、GFAP、P53和MMP-9的表达的相互关系。
　　 方法:随机收集30例临床手术切除的部分种类神经胶质瘤活组织标本,10例垂体腺瘤活组织标本及培养人类胶质母细胞瘤株U87,应用CRFR1抗体分别对所收集到的组织标本和培养细胞进行免疫组化染色并分析结果,并进一步分析胶质瘤中CRFR1的表达与胶质瘤标记物MGMT(O6-methylguanine DNA methyltranferase,O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶)、GFAP(glial fibrillary aeidic protein,胶质纤维酸性蛋白)、P53和MMP-9(Matrix Metalloproteinase9,基础金属蛋白酶9)之间的相互关系。提取培养细胞的总RNA,设计CRFR1引物,进行RT-PCR实验,并分析CRFR1的表达情况。
　　 结果:在神经胶质瘤阳性反应物位于细胞膜部位,呈清晰淡黄色或棕黄色。样本中可见到CRFR1阳性肿瘤细胞,其中许多为体积较大、细胞核圆且大、核浆比例也较大的细胞,有些阳性染色稍强呈棕褐色,有些稍弱呈淡黄色。在不同的病例中,阳性细胞百分率差异较大,约在5％～75％之间。组织中绝大多数闻质细胞呈阴性,在有些病例还可见血管内皮细胞也表达为阳性。CRFR1在30例神经胶质瘤中14例阳性,其中阳性星形胶质细胞瘤7例,表达为弱阳性到中度阳性,占总星形胶质细胞瘤的43.5％(7/16),病理分级中Ⅱ级5例,Ⅱ-Ⅲ级1例,Ⅲ级1例;阳性少支胶质细胞瘤3例均表达为弱阳性,病理级别为Ⅱ级2例,Ⅱ-Ⅲ级1例,占总少枝胶质细胞瘤的37.5％(3/8);病理级别均为Ⅳ级的阳性多形性胶质母细胞瘤3例全部表达为中度阳性;室管膜瘤共2例全部表达为阴性,其中病理级别为Ⅱ、Ⅲ级各一例;髓母细胞瘤1例表达为中度阳性;胶质瘤中CRFR1的表达与肿瘤标记物MGMT成正相关(rs=0.591 p=0.001见Tablel),与GFAP(rs=-0.299 P=0.108见Table2)、P53(rs=0.093 P=0.624见Table3)、MMP-9(rs=0.240 P=0.201见Table4)无相关性,与肿瘤级别(rs=-0.027 P=0.888见Table5)无相关性;在垂体嫌色细胞腺瘤瘤细胞呈圆形或卵圆形,核仁稍小,胞核异型性少见,胞质少,缺乏一致的核周空晕,细胞间无明显界限,细胞多成弥漫型排列,有些细胞沿纤维间质呈放射状排列,CRFR1阳性反应物位于瘤细胞的细胞膜,呈清晰的淡黄色或棕黄色,在一些紧密排列的细胞,阳性反应物连接成片,在间质的血管内皮细胞也有阳性CRFR1的表达,10例垂体嫌色腺瘤中有4例为阳性,包括1例TSH腺瘤表达为弱阳性和3例泌乳素腺瘤表达为弱阳性到中度阳性,1例生长激素腺瘤表达为阴性;U87胶质母细胞瘤细胞中免疫组化分析CRFR1表达为强阳性,RT-PCR结果发现CRFR1 mRNA在U87培养细胞中有相对较弱的表达。
　　 结论:在上述所研究的神经肿瘤类型中,CRFR1在星形胶质细胞瘤、少枝胶质细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤、髓母细胞瘤中有阳性表达,室管膜瘤中表达为阴性,胶质瘤中CRFR1的表达与MGMT成正相关,与GFAP、P53、MMP-9及肿瘤级别无相关性,垂体嫌色细胞瘤中泌乳素腺瘤和促甲状腺激素腺瘤中有弱到中度阳性CRFR1表达。人类胶质母细胞瘤株U87中CRFR1亦表达为阳性。

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材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 促肾上腺皮质激素释放因子受体1在神经系统肿瘤表达的研究

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