CD4+CD25+调节性T细胞在胆石症合并非酒精性脂肪性肝病发病中的作用及意义

摘要

目的:检测合并非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的胆石症(GD)患者外周血及肝内的CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)水平,并与单纯胆石症患者、单纯非酒精性脂肪性肝病患者及正常对照组进行比较,旨在探讨在胆石症与非酒精性脂肪性肝病发病过程中体内TregsT细胞的变化,为研究非酒精性脂肪性肝病合并胆石症的免疫发病机制及为非酒精性脂肪性肝病合并胆石症患者临床诊疗提供新的思路。
　　 方法:
　　 收集2009年9月-2010年12月在我院治疗的合并非酒精性脂肪性肝病的胆石症患者患者30例,单纯胆石症患者40例(ALT＜40 U/L),单纯非酒精性脂肪性肝病患者20例,并选择同期在我院体检的正常对照20例。所有患者均无饮酒史,并且实验室检查均无病毒性肝炎感染史。GD患者均由超声检查及术后病理证实,肝细胞脂肪变性经超声检查及肝组织病理证实。非酒精性脂肪性肝病的诊断依据2006中华医学会肝病学分会脂肪肝与酒精肝学组《非酒精性脂肪性肝病诊疗指南》。
　　 应用全自动生化分析仪检测血清ALT水平及肝功能、血脂、血糖等。并检测抗-HBV、抗-HAV、抗-HCV、抗-HDV、抗-HEV、抗-HIV,以除外其它嗜肝病毒感染。
　　 取外周肝素抗凝血,应用CD4、CD25免疫荧光抗体染色,红细胞裂解液溶解红细胞,完全溶血后加0.02M磷酸盐缓冲液洗涤,应用加多聚甲醛一磷酸盐缓冲液固定,重新悬浮细胞,上流式细胞仪检测,淋巴细胞设门,分析CD4+T细胞中CD4+CD25+T细胞的百分比。
　　 HE染色观察肝细胞病理变化。
　　 逆转录聚合酶链反应检测肝组织内Foxp3 mRNA表达。
　　 应用SPSS13.0统计软件分析实验数据,组间比较采用Kruskal-WallisH检验或Mann-Whitney U检验,两组间构成比的比较采用X2检验,双侧P＜0.05为差异有统计学意义。
　　 结果:
　　 1：各组人群的一般资料及ALT水平:非酒精性脂肪肝性肝病患者及胆石症患者体质量指数(BMI)、空腹血糖(FPG)、甘油三酯(TG)均高于对照组(均P＜0.05),实验组间比较,差异无统计学意义(P＞0.05),各组年龄及性别无明显差异。合并非酒精性脂肪性肝病的胆石症患者及单纯非酒精性脂肪性肝病患者ALT水平明显升高,两组间ALT水平比较,差异无统计学意义(P＞0.05),单纯胆石症患者ALT水平与正常对照组ALT水平均在正常范围(＜40 U/L)。
　　 2：外周血CD4+CD25+T细胞水平:合并非酒精性脂肪性肝病的胆石症患者组(0.049±0.013)、单纯非酒精性脂肪性肝病患者组(0.047±0.015)、单纯胆石症患者组(0.036±0.009)CD4+CD25+T细胞百分比均高于正常对照组(0.025+0.011)(均P＜0.05);合并非酒精性脂肪性肝病的胆石症患者组和单纯非酒精性脂肪性肝病患者组CD4+CD25+Tregs百分比高于单纯胆石症患者组(P＜0.05);非酒精性脂肪性肝病患者中根据ALT水平高低(ALT≥80 U/L和ALT＜80 U/L)分为高ALT水平组与低ALT水平组,发现高ALT水平组(0.052±0.015)CD4+CD25+Tregs百分比高于低ALT水平组(0.043±0.017)(P＜0.05);在高ALT水平组中合并非酒精性脂肪性肝病的胆石症患者组(0.057±0.012)CD4+CD25+Tregs百分比高于单纯非酒精性脂肪性肝病患者组(0.051±0.008)(P＜0.05);在低ALT水平组中合并非酒精性脂肪性肝病的胆石症患者组(0.042±0.007)CD4+CD25+Tregs百分比与单纯非酒精性脂肪性肝病患者组(0.041±0.013)比较,差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　 3：普通病理及Foxp3 mRNA的逆转录聚合酶链反应检测:各研究组均进行了肝组织活检,其中合并非酒精性脂肪性肝病的胆石症患者组和单纯非酒精性脂肪性肝病组肝组织均有不同程度的脂肪变,以中央静脉周围最为明显,多呈大泡性,肝细胞体积较正常明显增加,肿胀,细胞质内充满脂肪空泡,细胞核偏位,脂变肝细胞界限不清,肝窦变窄。合并非酒精性脂肪性肝病的胆石症患者组(0.51±0.12)肝内Foxp3 mRNA的表达高于单纯非酒精性脂肪性肝病患者组(0.14±0.08)和单纯胆石症患者组(0.12±0.07)(P＜0.05),单纯非酒精性脂肪性肝病患者组和单纯胆石症患者组比较,差异无统计学意义(P＞0.05),高ALT水平组(0.63±0.06)Foxp3 mRNA的表达高于低ALT水平组(0.31±0.05)(P＜0.05)。
　　 结论:
　　 1：外周血CD4+CD25+T细胞水平:合并非酒精性脂肪性肝病的胆石症患者组及单纯非酒精性脂肪性肝病患者组、单纯胆石症患者组CD4+CD25+T细胞百分比均高于正常对照组(均P＜0.05);合并非酒精性脂肪性肝病的胆石症患者组和单纯非酒精性脂肪性肝病患者组CD4+CD25+Tregs百分比高于单纯胆石症患者组(P＜0.05);非酒精性脂肪性肝病患者中根据ALT水平高低(ALT≥80 U/L和ALT＜80 U/L)分为高ALT水平组与低ALT水平组,发现高ALT水平组CD4+CD25+Tregs百分比高于低ALT水平组(P＜0.05);在高ALT水平组中合并非酒精性脂肪性肝病的胆石症患者组CD4+CD25+rregs百分比高于单纯非酒精性脂肪性肝病患者组(P＜0.05);在低ALT水平组中合并非酒精性脂肪性肝病的胆石症患者组CD4+CD25+Yregs百分比与单纯非酒精性脂肪性肝病患者组比较,差异无统计学意义(P＞0.05)。表明Tregs参与非酒精性脂肪性肝病与胆石症的共同发病,而且Tregs与非酒精性脂肪性肝病患者肝脏炎症活动密切相关,在非酒精性脂肪性肝病进展中发挥重要作用。
　　 2：合并非酒精性脂肪性肝病的胆石症患者组肝内Foxp3 mRNA的表达高于单纯非酒精性脂肪性肝病患者组和单纯胆石症患者组(P＜0.05),单纯非酒精性脂肪性肝病患者组和单纯胆石症患者组比较,差异无统计学意义(P＞0.05),高ALT水平组Foxp3 mRNA的表达高于低ALT水平组(P＜0.05)。通过对Tregs在肝内基因表达的检测,可进一步证实Tregs与非酒精性脂肪性肝病患者肝脏炎症活动密切相关,在非酒精性脂肪性肝病进展中发挥重要作用。

目录

文摘

英文文摘

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 非酒精性脂肪性肝病与胆石症

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