河北省甲型H1N1流感病毒血凝素和神经氨酸酶基因特性研究

摘要

目的：掌握河北省甲型H1N1流感病毒的流行情况；对分离到的甲型H1N1流感病毒株血凝素HA基因及NA基因进行分析比较。甲型H1N1流感病毒血凝素重链区(HA1)第222氨基酸位点编码天冬氨酸突变为编码甘氨酸(D222G)，可能会使病毒更容易结合下呼吸道受体；对NA基因片段进行扩增、测序，NA核苷酸编码的275位氨基酸发生组氨酸(H)替换为酪氨酸(Y)，病毒对奥司他韦（达菲）耐药，分析其耐药情况，为流感大流行的防控提供科学依据。
　　 方法：
　　 1.2009年6月～2010年12月，河北省11个地级市28所哨点医院通过中国流感/禽流感监测信息系统上报流感样病例(ILI，influenza-like illness)就诊数据，Excel软件统计分析ILI时间变化趋势。
　　 2.鼻咽拭子标本用狗肾传代(MDCK)细胞分离流感病毒，用国家流感中心提供的标准参考血清经血凝抑制试验鉴定分型。选取不同时间、地域10株甲型H1N1流感病毒进行HA基因全序列分析，对所有毒株测HA区379-1204片段和NA区726-1346片段。
　　 3.提取病毒RNA，参照世界卫生组织提供的特异引物序列，经RT-PCR方技术扩增出基因片段HA和NA，对产物核苷酸序列测定，以代表株为基准，用DNAStar软件比较分析同源性、变异趋势及耐药情况。
　　 结果：
　　 1.28所哨点医院流感样病例就诊高峰出现在2009年第36-45周期间，就诊百分比峰值最高为11.92％，平均为3.16％，病例以青少年为主。
　　 2.2009年6月至2010年12月，河北省流感监测哨点医院采集ILI咽拭子标本1257份，实时定量PCR检测流感病毒核酸阳性482份，阳性率为38.35％，其中乙型流感病毒阳性119份，季节性H3N2阳性134份，甲型H1N1流感病毒阳性229份。用MDCK细胞分离到流感病毒278株，毒株分离率为22.12％，其中乙型Victoria系40株，季节性H3N2亚型71株，甲型H1N1流感病毒167株，占60.07％。
　　 3.利用特异性引物对所有167株甲型H1N1流感病毒株，采用RT-PCR方法分别扩增出其编码HA和NA蛋白的基因片段，经琼脂糖凝胶电泳后，通过凝胶成像系统观察，均出现相应条带。
　　 4.对扩增的甲型H1N1流感病毒基因片段进行核苷酸序列测定，分别与参比株进行核苷酸和氨基酸序列同源性比较分析。
　　 4.1 10株甲型H1N1流感病毒毒株HA基因与疫苗株A/California/07/2009相比高度同源，核苷酸同源性为98.9～99.5％，氨基酸同源性为98.4～99.3％，有3个位点氨基酸发生同样的替换(P100 S，S220T,E391K)。采集于2010年12月标本分离的两株甲型H1N1流感病毒A/河北桥东/SWL178/2010和A/河北裕华/SWL1261/2010在202、214、468三个氨基酸位点与其他毒株不同。
　　 4.2 所有167株甲型H1N1流感病毒的HA1区715-717位核苷酸均为GAT，编码天冬氨酸，第222位氨基酸均未发生D222G突变。
　　 4.3 DNAStar绘制的种系发生图谱显示，甲型H1N1流感病毒HA1与之前在人间传播的流感病毒进化距离较远，河北省分离的甲型H1N1流感病毒HA1与其他国家及地区的毒株亲缘性很近，属于一个分支。
　　 4.4 甲型H1N1流感毒株NA基因核苷酸823-825位编码275位氨基酸，河北省所有甲型H1N1流感毒株均为CAC，与达菲敏感株A/Australia/3/2009一致，而与耐药株A/Russia/61/2009为TAC不同；第275位氨基酸均为组氨酸(H)未发现H275Y变异。
　　 结论：
　　 1.河北省ILI就诊和甲型H1N1流感病毒毒株分离高峰均处于2009年10月至12月份阶段。
　　 2.用MDCK细胞从1257份标本中，共分离到流感病毒278株，167株鉴定为甲型H1N1流感病毒，占60.07％。
　　 3.河北省甲型H1N1流感病毒HA基因与疫苗株A/California/07/2009高度同源，与疫苗株及各毒株之间核苷酸同源性均大于98.9％。
　　 4.167株甲型H1N1流感病毒HA1基因第222位均为天冬氨酸(D)，尚未发现D222G变异。
　　 5.所有甲型H1N1流感病毒NA基因没有发生H275Y氨基酸替换，说明河北省流行株对达菲敏感。
　　 6.继续监测甲型H1N1流感病毒株基因变异情况非常重要，为我们及时发现病毒耐药及病毒变异引起的严重感染或逃逸疫苗株的免疫等情况提供帮助。

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河北省甲型H1N1流感病毒血凝素和神经氨酸酶基因特性研究

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结果

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结论

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综述 四次流感大流行病原学概述

参考文献

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