三参方对慢性萎缩性胃炎大鼠胃组织细胞凋亡和相关调控基因的影响

摘要

目的:三参方(由党参、丹参、玄参、黄连、清半夏、炒白芍、炙甘草、陈皮、炒白术组成)具有益气养阴,扶助中州等功效,经临床观察证明,对慢性萎缩性胃炎(Chronic atrophic gastritis,CAG)具有较好的治疗效果,为了进一步探讨其作用机制,参照相关文献采用0.2％的脱氧胆酸钠溶液及50℃热水给大鼠灌胃,并结合饥饱失常的综合法复制CAG大鼠模型,同时施加药物干预,通过观察其对CAG大鼠血清GAS、血浆MTL、血清SOD和MDA含量的影响,探讨其改善胃功能方面的作用机制;通过观察其对胃组织细胞凋亡及相关调控基因Caspase3、Bcl-2、Fas表达的影响,探讨其抗胃组织细胞凋亡的作用机制;并运用HE染色方法观察该方对胃组织形态学的影响。
　　 方法:
　　 选用Wistar大鼠60只,自由饮水进食,饲养于18℃～22℃明暗各12小时的清洁级动物实验室内,正常喂养一周后,随机分为6组,每组10只。具体分组情况如下:(1)正常对照组(简称正常组,normalcontrol group,N);(2)模型对照组(简称模型组,model group,M);(3)三参方低剂量组(简称低剂量组,low-dose Prescription Sanshen group,L);(4)三参方高剂量组(简称高剂量组,high-dose Prescription Sanshengroup,H);(5)阳性药(维霉素)对照组(简称维霉素组,W);(6)阳性药(三九胃泰)对照组(简称三九胃泰组,S)。动物造模参照相应文献以0.2％的脱氧胆酸钠溶液灌胃,1.5ml/只/d,与脱氧胆酸钠溶液灌胃间隔5h,用50℃热水2ml/只/d灌胃,并且加用饥饱失常(即2d喂食,保证足量,1d停食),正常组大鼠给予相应等量的蒸馏水,普通饲料喂养,自由饮水,持续造模共8周。第九周开始各组分别给与相应的药物灌胃,给药剂量按药理实验方法学计算,三参方高、低剂量组分别按3.67g/kg、1.83g/kg体重的标准灌服,两个对照组均按1g/kg体重的标准灌服,正常组和模型组大鼠均灌服等量的蒸馏水。各组1次/d灌胃,每次用药体积均按1ml/100g计算。给药9周末,于最后1次给药禁食12h后麻醉状态下股动脉取血,分离血浆,密封,-20℃冷存以备检测GAS、MTL、SOD和MDA的含量。同时迅速剖开腹部,分离胃组织,沿胃窦近幽门口至胃大弯方向取少许胃组织,生理盐水洗净血液,滤纸吸干水分,放置于70％乙醇溶液中,4℃冰箱冷贮,再取0.5cm×0.5cm大小的组织块,用4％的多聚甲醛固定,以备HE染色进行组织形态学观察。取已固定的胃组织放于100目不锈钢网上,下置一平皿,用眼科剪刀将组织剪碎至1mm3大小,用眼科镊子轻轻搓组织块,边搓边以PBS液冲洗,直至将组织搓完。将平皿中的混悬液用300目筛网过滤去除细胞团块,收集细胞悬液,500～800r/min离心2min,弃上清,保留沉淀,加入PBS0.3ml,稀释混匀后,将单细胞悬液分成3份,调整每份样品的细胞数为1×106,分别用于检测胃组织细胞增殖与凋亡及相关调控基因Caspase3、Fas和Bcl-2蛋白表达。所有数据均采用SPSS13.0软件进行统计分析。
　　 结果:
　　 1：各组大鼠胃组织形态学的变化
　　 正常组大鼠胃黏膜厚度正常,上皮完整,腺体排列整齐,固有腺体及黏膜层毛细血管无扩张,未见炎症反应。细胞呈单层柱状,腺上皮和腺管分界清楚。模型组大鼠上皮细胞变性、坏死、脱落,腺体有不同程度的萎缩,黏膜下小血管清晰可见,间质内有大量炎性粒细胞浸润。各治疗组大鼠胃黏膜均有不同程度的改善,三九胃泰治疗组上皮细胞部分变性、脱落,腺体排列比模型组整齐,有少量炎性细胞浸润。维霉素治疗组胃黏膜有少量炎性细胞浸润,好于模型组。低剂量组腺体排列较整齐,紊乱程度变化较模型组轻。高剂量组胃黏膜结构较清晰,上皮排列整齐,细胞无明显变性坏死,腺体大小形态较一致,基本接近正常组。
　　 2：各组大鼠血清GAS和血浆MTL含量的变化
　　 模型组大鼠的血清GAS和血浆MTL的含量较正常组明显下降(P＜0.01)。经药物治疗后,各治疗组与模型组比较,GAS和血浆MTL的含量明显升高,均优于模型组,有显著性差异(P＜0.01或P＜0.05);高剂量组与其他治疗组比较,GAS和血浆MTL的含量明显升高,有显著性差异(P＜0.01或P＜0.05);其他治疗组之间比较无显著性差异(P＞0.05)。
　　 3：各组大鼠血清SOD和MDA含量的的变化
　　 模型组大鼠的血清SOD的含量较正常组明显下降,有显著性差异(P＜0.01),MDA的含量较正常组明显升高,有显著性差异(P＜0.01)。经药物治疗后,各治疗组血清SOD含量均高于模型组,有显著性差异(P＜0.01),血清MDA的含量均低于模型组,有显著性差异(P＜0.01);其中高剂量组血清SOD含量高于其他治疗组,而血清MDA的含量低于其他治疗组,有显著性差异(P＜0.01或P＜0.05);低剂量组血清MDA的含量低于三九胃泰组,有显著性差异(P＜0.05);其他治疗组之间比较无显著性差异(P＞0.05)。
　　 4：各组大鼠胃组织细胞凋亡率的变化
　　 流式细胞仪检测结果显示:模型组AI值比正常组明显升高,有显著性差异(P＜0.01)。经药物治疗后,各治疗组AI值均比模型组明显下降,有显著性差异(P＜0.05);其中,高剂量组AI值低于维霉素组和三九胃泰组,有显著性差异(P＜0.01);低剂量组AI值低于维霉素组和三九胃泰组,有显著性差异(P＜0.05);维霉素组和三九胃泰组之间比较无明显差异(P＞0.05)。
　　 5：各组大鼠胃组织细胞增殖周期的变化
　　 模型组大鼠G0/G1期细胞百分率较正常组升高(P＜0.01);G2/M期和S期细胞百分率均较正常组降低(P＜0.05)。经用药治疗后,各治疗组G0/G1期细胞百分率均低于模型组,有显著性差异(P＜0.01);G2/M期和S期细胞百分率均高于模型组,有显著性差异(P＜0.01或P＜0.05)。而各治疗组之间比较无明显差异(P＞0.05)。
　　 模型组PI值低于正常组,有显著性差异(P＜0.01)。经用药治疗后,各治疗组PI值均高于模型组,有显著性差异(P＜0.01);而各治疗组之间比较无明显差异(P＞0.05)。
　　 6：各组大鼠胃组织细胞凋亡相关基因蛋白Caspase3、Fas和Bcl-2表达FI值的变化 模型组Caspase3和Fas蛋白表达FI值均高于正常组,而Bcl-2蛋白表达FI值低于正常组,有显著性差异(P＜0.01或P＜0.05)。经用药治疗后,各治疗组Fas、Caspase3蛋白表达FI值均低于模型组,而Bcl-2蛋白表达FI值均高于模型组,有显著性差异(P＜0.01),有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01);其中,高、低剂量组的Caspase3蛋白表达FI值均低于维霉素组和三九胃泰组,有显著性差异(P＜0.01或P＜0.05),而高、低剂量组之间比较未见显著性差异(P＞0.05);高剂量组Fas蛋白表达FI值则低于低剂量组、维霉素组和三九胃泰组,有显著性差异(P＜0.01或P＜0.05);各治疗组的Bcl-2蛋白表达FI值比较未见显著性差异(P＞0.05)。
　　 结论:
　　 1：三参方可明显改善CAG大鼠胃组织的病变程度,表现为用药后各治疗组大鼠胃组织细胞颗粒样变性减轻或消失,胃组织纤维排列整齐,间质无明显扩张充血,说明本方对胃组织细胞具有保护作用。
　　 2：三参方能明显增强大鼠胃功能,抗氧化损伤,表现为用药后CAG大鼠的GAS、MTL、SOD均显著升高,MDA显著下降,说明其能够增强CAG大鼠胃的收缩和分泌功能和抗氧化损伤能力。
　　 3：三参方可使Bcl-2基因蛋白表达量增加,Fas和Caspase3基因蛋白表达量降低,细胞凋亡率下降,以保护胃组织细胞、避免胃组织细胞数量减少,从而达到抗胃组织萎缩作用。此可能是三参方治疗CAG的作用机制之一。

目录

文摘

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前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 中医药治疗慢性萎缩性胃炎的研究概况

致谢

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