SAMP8小鼠快速老化前期行为与形态学变化特征的研究

摘要

目的：应用SAMP8小鼠为研究对象，联合使用老化度评分、行为学实验、病理形态学和免疫组织化学等方法，观察其在快速老化前期行为学及其海马CA1区形态学的变化特征，为轻度认知功能障碍(MCI)的研究提供实验基础。
　　 方法：选取健康雄性3、4、5、6、7月龄快速老化SAMP8小鼠各8只作为实验组（简称P8③组、P8④组、P8⑤组、P8⑥组、P8⑦组）。选取健康雄性3、4、5、6、7月龄SAMR1小鼠各8只作为同源正常对照组（简称R1③组、R1④组、R1⑤组、R1⑥组、R1⑦组）。
　　 1.老化度评分：采用日本京都大学竹田俊男和细川昌则教授制定的老化度评分标准，将外在形体及行为的老化改变从反应性、被动性逃避反应、皮毛光泽、皮毛粗糙程度、脱毛程度、皮肤溃病、眼周损害、角膜混浊、角膜溃疡、白内障、脊柱后凸等11项进行观察，再根据程度不同，将每项指标划分为0～4级不等，标定分值。根据这个评分标准客观评分，积分越高则老化度越严重。
　　 2.Morris水迷宫实验：将各组小鼠于迷宫实验室环境下饲养2d。训练在每天上午8:00～12:00进行。定位航行实验：将Morris水迷宫均分为4个象限，平台放入第Ⅳ象限中。小鼠分别自4个象限面向池壁入水，视频采集系统跟踪并记录找到平台所需时间，实验进行5天。空间探索实验：第6天，撤掉平台，记录小鼠120s内跨越平台的次数。
　　 3.组织切片制备及染色观察：每组均取8只小鼠，4％水合氯醛腹腔注射麻醉，暴露胸腔，将输液针刺入左心室，同时剪开右心耳，用生理盐水快速冲洗，4％多聚甲醛灌注。自上丘至视交叉节段取脑组织，用刀片把脑组织从正中矢状位分为左右两半，一半用于Golgi染色，一半制备成石蜡切片，分别用于Nissl染色和抗Aβ免疫组化染色。
　　 结果：
　　 1.老化度评分结果：SAMP8小鼠和SAMR1小鼠的老化度评分均随月龄的增长而增加，但是增加程度不同。SAMP8小鼠从5月龄开始老化度评分随月龄增长明显增加，SAMR1小鼠随月龄增长老化度评分略微增加。其中P8④组与P8③组相比，老化度评分值差异无统计学意义（P＞0.05），略高于同月龄SAMR1小鼠的评分值(P＞0.05);P8⑤组评分值明显高于P8④组和R1⑤组(P＜0.01);P8⑥组略高于P8⑤组（P＞0.05），但是明显高于R1⑥组(P＜0.01)；P8⑦组显著高于P8⑥组和R1⑦组(P＜0.01)。
　　 2.Morris水迷宫实验结果：P8④组逃避潜伏期长于P8③组（P＞0.05），跨越平台次数亦多于P8③组（P＞0.05），与同龄对照组R1④组和R1③组相比，逃避潜伏期和跨越平台次数差异无显著性(P＞0.05);P8⑤组与P8④组和R1⑤组相比，逃避潜伏期均明显延长（P＜0.01），跨越平台次数明显减少(P＜0.01)；P8⑥组与P8⑤组相比逃避潜伏期和跨越平台次数差异无统计学意义（P＞0.05），但是P8⑥组与R1⑥组相比差异有统计学意义(P＜0.01);P8⑦组逃避潜伏期显著长于P8⑥组和R1⑦组(P＜0.01)，跨越平台次数亦显著少于P8⑥组和R1⑦组(P＜0.01)。
　　 3.Golgi染色结果：P8③组和P8④组海马CA1区第2、3级树突棘形态规则，排列整齐，其树突棘密度分别为0.84±0.07/μm、0.85±0.06/μm，两组之间差异无统计学意义（P＞0.05），与同源对照R1⑧组、R1④组相比差异亦无统计学意义(P＞0.05);P8⑤组树突棘个数明显减少，与P8④组和R1⑤组相比差异均具有统计学意义(P＜0.01)；P8⑥组树突棘同样减少，与P8⑤组相比差异无统计学意义（P＞0.05），但是与R1⑥组相比，个数显著减少(P＜0.01);P8⑦组树突棘个数显著减少，与P8⑥组和R1⑦组相比差异均具有统计学意义（P＜0.01）。
　　 4.Nissl染色结果：P8③组和P8④组海马CA1区神经元尼氏体丰富致密，二者之间海马神经元数量差异无统计学意义（P＞0.05），与同龄对照组相比之间差异亦无统计学意义(P＞0.05)；P8⑤组海马神经元胞浆内尼氏体稀疏，神经元出现丢失现象，与P8④组和R1⑤组相比差异均具有统计学意义P＜0.05)；P8⑥组海马神经元个数与P8⑤组相比差异无统计学意义（P＞0.05），但是与R1⑥组相比，个数显著减少(P＜0.01)；P8⑦组海马CA1区神经元较多核固缩，胞浆内尼氏体减少，部分消失，细胞数量明显减少，与P8⑥组和R1⑦组相比差异均具有统计学意义(P＜0.01)。
　　 5.抗Aβ免疫组化结果：P8③组和P8④组之间Aβ阳性细胞数目及吸光度差异均无统计学意义(P＞0.05)，与同龄对照组相比差异亦无统计学意义(P＞0.05);P8⑤组阳性细胞个数和吸光度与P8④组和R1⑤组相比差异均具有统计学意义(P＜0.05)；P8⑥组Aβ阳性细胞数目及吸光度与P8⑤组相比差异无统计学意义(P＞0.05)，但是与R1⑥组相比，差异具有统计学意义(P＜0.01)；P8⑦组Aβ阳性细胞数目及吸光度显著大于P8⑥组和R1⑦组(P＜0.01)。
　　 结论：
　　 1.SAMP8小鼠从5月龄开始出现衰老征象，表现为空间学习记忆的获得和储存能力下降，提示该鼠步入老化前期，7月龄时则表现出明显的老化体征，学习记忆能力显著下降，进入快速衰老期。
　　 2.5、6月龄SAMP8小鼠出现海马CA1区神经元的丢失和树突棘数目的显著减少，与学习记忆能力开始明显下降的时间一致。
　　 3.5、6月龄SAMP8小鼠海马CA1区Aβ阳性神经元显著增多，提示Aβ的神经毒性作用可能是神经元丢失和树突棘数目减少的原因。
　　 4.SAMP8小鼠7月龄开始进入快速老化期（即痴呆期）前的5、6月龄，与同龄正常对照组相比，已表现出行为和形态学上的明显变化，提示该鼠此阶段已进入轻度认知功能障碍阶段，即MCI。

目录

文摘

英文文摘

英文缩写

SAMP8小鼠快速老化前期行为与形态学变化特征的研究

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 轻度认知功能障碍的研究现状

参考文献

致谢

个人简历