过敏性紫癜外周血单个核细胞转录因子T-bet Mrna、GATA-3 Mrna的表达

摘要

目的:过敏性紫癜(Henoch-Schonlein purpura HSP)是一种可累及全身多个器官的小血管炎,儿童多见,属变应性系统性小血管炎,以广泛的小血管炎为病理基础,皮肤紫癜、腹痛、便血、关节痛和尿蛋白等症状为其主要临床特征。HSP病因及发病机制尚未完全阐明。感染、食物、药物等均可以作为致敏因素,使具有敏感素质的个体产生变态反应,从而造成一系列损伤。
　　 HSP是一种由免疫介导的全身性血管炎,近年来的基础及临床研究发现,HSP患者血清中IgA水平升高,而且血管壁有IgA免疫复合物(IgA-IC)沉积,提示本病的发病与IgA介导的免疫反应有关,目前通常认为这种高免疫球蛋白血症是患者B淋巴细胞多克隆活化的结果,形成大量IgA免疫复合,沉积在全身小血管壁而致血管炎,可累及多脏器出现各种临床表现。Th细胞分化决定免疫应答的性质。Th1细胞促进细胞免疫,增强吞噬细胞介导的抗感染机制;Th2细胞促进B细胞增殖、分化和产生抗体,而增强B细胞介导的体液免疫应答。因此其发病机制多认为与T细胞亚群功能紊乱有关。
　　 Th1、Th2亚群在免疫应答中起着关键的作用。细胞分化需要转录因子家族的精密控制。免疫系统中,CD4+辅助性T细胞可分化为不同的细胞谱系,Th1、Th2、调节性T细胞和Th17。转录因子T-bet和GATA-3是决定Th0细胞向Th1细胞或Th2细胞分化的两个关键且特异性转录因子。T-bet和其他T-box家族成员具有高度保守的T-box DNA结合功能域。这一结构域是大分子的,由189个氨基酸组成。免疫系统中,Th1细胞分化需要T-bet,并且关于T-bet在Th1细胞分化中作用的研究很多。GATA-3转录因子是GATA家族的主要成员。GATA-3是TH2细胞分化的主要调节因子,这广为所知。如果在免疫系统中选择性删除GATA-3,TH2细胞将不能形成。这充分说明了GATA-3在TH2细胞分化中的重要作用。本研究通过实时荧光定量RT-PCR技术检测T-bet、GATA-3 mRNA在HSP患者外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells PBMC)中的表达,分析其在发病机制中所发挥的作用和意义。
　　 实时荧光定量PCR是一种基于传统PCR检测方法上的新技术,在实时荧光定量PCR的过程中,靶序列的扩增与荧光信号的检测同时进行,全程定量PCR仪都采集荧光信号,分析软件在实验结束后按数学算法自动扣除荧光本底信号并且设定阈值从而得到每个样品的Ct值。它有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,具有高特异性和可靠性,实验结果稳定,重复性好等优点。
　　 方法:32例过敏性紫癜患者均来自河北医科大学第二医院皮肤科门诊,其中男14例,女18例。其中14例为单纯皮肤组(仅有皮疹)18例为混合组(有关节、消化道症状或累计肾脏中的一项或多项)平均年龄(26.9±0.5)岁,病程2天-1年。起疹前有明确感染史者14人,无感染史者18人。患者组入选标准:(1)具有典型皮肤紫癜表现,伴或不伴腹痛及关节痛、血尿等症状,血小板计数、功能及凝血相关检查正常;(2)未合并自身免疫性疾病、过敏性疾病、肿瘤和其他严重系统性疾病;(3)受试前1月内未使用糖皮质激素或其他影响全身免疫功能的药物。对照组:15例健康人群,均无过敏性疾病、自身免疫性疾病及家族史。经统计学分析,患者组性别、年龄与对照组均无统计学差异。研究对象抽取外周静脉血,采用实时荧光定量RT-PCR技术检测外周血单个核细胞中T-bet mRNA,GATA-3 mRNA的表达状况。采用SPSS13.0统计软件。所有实验数据经正态性检验以明确资料的总体分布类型,正态分布数据用均数±标准差表示(x±s),组间比较采用t检验;非正态分布数据用中位数(四分位间距)表示[Md(Interquartile Range)],组间比较采用Wilcoxon秩和检验。P＜0.05认为有统计学意义。
　　 结果:
　　 1与正常对照组相比,HSP患者T-bet mRNA的表达水平降低(△Ct值的平均秩次值,HSP患者27.70,正常对照组16.10,单侧检验P＜0.05),GATA-3 mRNA的表达水平升高(△Ct值平均秩次值HSP患者18.25,正常对照组36.27,单侧检验P＜0.05)。
　　 2 HSP患者中,混合组和单纯组皮肤组比较,T-bet mRNA的表达水平无统计学差异(△Ct值的平均秩次值,IISP单纯皮肤组15.86,混合组17.00,单侧检验P＞0.05),HSP混合组GATA-3 mRNA的表达水平升高有统计学意义(HSP单纯皮肤组3.11±0.63,混合组2.20±0.78,P＜0.05)。
　　 结论:本研究从转录水平上提示HSP的免疫功能紊乱是以Th2细胞亚群占优势的体液免疫紊乱为主的可能性极大。混合组HSPGATA-3mRNA的表达水平高于单纯皮肤组,这使得混合组HSPT-betmRNA表达水平相对的更低,Th1/Th2失衡更严重,GATA-3 mRNA表达升高的程度可能与该病的严重程度有一定的联系。

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结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 过敏性紫癜发病机制的研究进展

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