Raf激酶抑制蛋白(RKIP)基因甲基化及蛋白表达与食管鳞状细胞癌相关性研究

摘要

目的：食管鳞状细胞癌(Esophageal Squamous Cell Carcinoma，ESCC)是我国北方特别是河北涉县、磁县等地常见的消化道恶性肿瘤之一，年平均死亡率高达142.19/10万。临床就诊病例多为中晚期，花费巨大且疗效差，所以对ESCC的发病机制的研究受到普遍重视。
　　 DNA甲基化是一种非常重要的表观遗传学机制。本研究通过检测ESCC组织中RKIP基因启动子甲基化状态和蛋白表达水平，探讨该基因在ESCC的发生、发展、浸润、转移中的作用，以便为ESCC的早期诊断、治疗及预后提供新的实验依据。
　　 方法：
　　 1.采用改进的甲基化特异性聚合酶链反应(methylation specific PCR，MSP)技术检测77例食管鳞状细胞癌组织及77例癌旁非肿瘤组织中RKIP基因启动子区的甲基化状态。
　　 2.免疫组织化学(immunohistochemistry，IHC)S-P法检测77例食管鳞状细胞癌组织，77例癌旁非肿瘤组织中RKIP基因的蛋白表达情况。
　　 结果：
　　 1.甲基化状态
　　 RKIP基因在食管鳞状细胞癌及癌旁非肿瘤组织中的甲基化率分别为75.3％(58/77)和27.3％(21/77)，食管鳞状细胞癌组的甲基化发生率显著高于癌旁组，差异有统计学意义(x2=35.582，P<0.01)；在食管鳞状细胞癌组织中，Ⅲ、Ⅳ期甲基化率79.5％(35/44)高于Ⅰ、Ⅱ期甲基化率69.7％(23/33)，小于60岁与大于等于60岁患者食管鳞状细胞癌组织中RKIP基因甲基化率分别为79.3％(23/29)和72.9％(35/48)，男性与女性食管鳞状细胞癌患者甲基化率分别为74.6％(44/59)和77.8％(14/18)，食管鳞状细胞癌患者不同年龄、性别及TNM分期的甲基化率比较，差异均无统计学意义(x2=0.398，x2=0.000，x2=0.984，P>0.05)；食管鳞状细胞癌患者高、中、低分化癌组织中RKIP基因甲基化率分别为50.0％(10/20)、73.1％(19/26)和93.5％(29/31)，有、无淋巴结转移患者食管鳞状细胞癌组织中甲基化率分别为86.7％(39/45)和59.4％(19/32)，不同分化程度与有无淋巴结转移的食管鳞状细胞癌组织中甲基化率比较，差异有统计学意义(x2=12.511，x2=7.494，P<0.01)。
　　 2.RKIP基因的蛋白表达
　　 食管鳞状细胞癌组织中RKIP基因的蛋白表达率为36.4％(28/77)，癌旁非肿瘤组织中RKIP基因的蛋白表达率为76.6％(59/77)，前者明显低于后者，二者有统计学意义(x2=25.39，P<0.01)；小于60岁与大于等于60岁患者食管鳞状细胞癌组织中RKIP基因蛋白表达率分别为31.0％(9/29)和39.6％(19/48)，男性与女性患者食管鳞状细胞癌组织中RKIP基因蛋白表达率分别为37.3％(22/59)和33.3％(6/18)，按TNM分期，食管鳞状细胞癌Ⅰ、Ⅱ期与Ⅲ、Ⅳ期组织中RKIP基因蛋白表达率分别为48.5％(16/33)和27.3％(12/44)，高、中、低分化食管鳞状细胞癌组织中RKIP基因蛋白表达率分别为45.0％(9/20)、42.3％(11/26)和25.8％(8/31)，食管鳞状细胞癌患者不同年龄、性别、TNM分期、肿瘤分化程度的蛋白表达率比较，差异无统计学意义(x2=0.571，x2＝0.093，x2=3.667，x2=2.535，P>0.05)；有、无淋巴结转移患者食管鳞状细胞癌组织中蛋白表达率分别为24.4％(11/45)和53.1％(17/32)，差异有统计学意义(x2=6.648，P=0.01)。
　　 3.RKIP基因启动子区甲基化与其蛋白表达之间的关系
　　 食管鳞状细胞癌组织中RKIP基因甲基化阳性组中，蛋白表达阳性率为29.3％(17/58)，RKIP基因甲基化阴性组蛋白表达阳性率为57.9％(11/19)，食管鳞状细胞癌组织甲基化阳性与甲基化阴性者RKIP基因蛋白表达间差异无统计学意义(x2=0.202，P>0.05)。
　　 结论：
　　 1.RKIP基因在食管鳞状细胞癌组的甲基化发生率显著高于癌旁组织，提示RKIP基因启动子甲基化可能与食管鳞状细胞癌的发生有关，。
　　 2.RKIP基因的甲基化与TNM分期无关，提示RKIP基因启动子甲基化与食管鳞状细胞癌的病程进展无关。
　　 3.组织分化程度和有无淋巴结转移与RKIP基因的甲基化率有关，提示RKIP基因启动子甲基化可能与食管鳞状细胞癌的预后有关。
　　 4.食管鳞状细胞癌中RKIP基因蛋白表达与其启动子区甲基化无关，提示甲基化可能不是导致RKIP蛋白表达降低的主要原因。