人尿脱落细胞FISH检测与尿细胞学检测和计算机断层扫描(CT)检测在上尿路尿路上皮肿瘤诊断中的应用及对比研究

摘要

目的：上尿路尿路上皮细胞癌包括肾盂癌和输尿管癌，在临床中比较少见，约占所有尿路上皮肿瘤的5％。肾盂和输尿管的肌层较膀胱薄，周围具有丰富的淋巴管，尤其是输尿管尿路上皮细胞癌，肿瘤极易穿透肌层发展为浸润性肿瘤，因此上尿路尿路上皮细胞癌临床预后均较差，有报告称，有19％的上尿路尿路上皮细胞癌在初诊时就已经发生了转移。能够早期诊断，对于疾病的治疗和患者的生存率都显得尤为重要。临床上常用的检查方法有CT和尿脱落细胞学检查，然而二者均有各自不完美的地方。对于尿路上皮细胞癌，荧光原位杂交(FISH)是一项新兴的诊断技术，国内外许多学者进行了许多FISH诊断膀胱肿瘤的研究，而对于上尿路肿瘤研究较少。本实验比较尿脱落细胞荧光原位杂交(FISH)、检查、计算机断层扫描(CT)和尿脱落细胞学检查对以血尿为主要症状的上尿路尿路上皮细胞癌诊断的临床有效性，为临床上尿路尿路上皮细胞癌的诊断提供参考数据，为完善上尿路尿路上皮细胞癌的诊断提供理论基础。
　　材料与方法：选取河北医科大学第二医院泌尿外科2010年8月至2011年8月可疑上尿路尿路上皮细胞癌的血尿患者30例，其中男性23例，女性7例。对30例患者均行FISH检测、CT检查和尿脱落细胞学检查，共有21例经病理诊断为上尿路尿路上皮细胞癌，其中肾盂癌14例，输尿管癌7例，分期为Ta/T16例，T212例，T3/T43例。另外9例分别为1例为肾盂神经内分泌癌，2例为肾结核，6例为肾透明细胞癌。
　　荧光原位杂交技术(FISH)是起源于20世纪80年代末的一种分子遗传学技术，探针为已知的荧光标记的核酸，按照碱基互补配对原则，将待检标本中的未知的单链核酸与探针特异性结合，形成杂交双链核酸，再应用荧光显微镜检测荧光信号，从而得出结果。FISH可以检测染色体数目异常和染色体畸变，在分子水平表现为基因片段扩增、缺失、碱基改变等。本实验使用CSP3/CSP7组合探针、GLPp16/CSP17组合探针进行检测。
　　通过对20例正常人(男10例、女10例)的尿液样本，使用相同方法进行FISH实验，两组探针组合分别观察100个的细胞。统计出不同类型异常细胞的百分比，建立阈值。阈值=平均值(M)+3×标准差(SD)。分别建立3号、7号、17号染色体≥3个信号点的阈值，建立p16位点0个信号点、1个信号点的阈值(结果见Table1)。此阈值为本实验室前期实验确定。
　　30例患者的FISH结果与阈值相比较进行FISH判读。FISH阳性判读标准为3、7、17号染色体和p16(-1)有两项及两项以上异常或者p16(-2)单独一项异常大于15％。同时，30例患者分别行计算机断层扫描检查(CT)和尿脱落细胞学检查，并行膀胱镜检查以排除膀胱内肿瘤，以输尿管镜活检病理或手术切除标本病理为最终确诊依据，并对疾病进行分期，比较三种诊断方法的敏感性和特异性(CT和尿脱落细胞学诊断为可疑按阳性结果处理)。取尿液标本，不少于200ml，否则影响细胞计数，输尿管镜活检病理结果与手术切除后病理检查或病理分期不一致时，以手术切除标本病理结果为准。
　　结果：FISH检测、CT检查及尿细胞学检查对上尿路尿路上皮细胞癌的总的敏感性分别为85.7％、66.7％、28.6％。三种方法进行两两比较，FISH和CT比较，P=0.014<0.05/3，有统计学意义；FISH与尿脱落细胞学检查比较P=0<0.05/3，有统计学意义；CT和尿脱落细胞学检查比较，P=0.013<0.05/3，有统计学意义。FISH对Ta/T1、T2、T3/T4各肿瘤分期检测结果分别为66.7％、91.7％、100％。CT检查结果分别为33.3％、75.0％、100％。尿脱落细胞学检查结果分别为0％、25.0％、100％。FISH、CT及尿脱落细胞学诊断上尿路尿路上皮细胞癌的特异性分别为88.9％、77.8％、100％。三者比较P>0.05，无统计学意义。
　　结论：FISH检测上尿路尿路上皮细胞癌的敏感性明显高于CT检查，而CT检查的敏感性明显高于尿脱落细胞学检查，并且伴随着疾病分期的减低，这种差异越明显。三者在特异性上无明显差别。FISH技术可以明显的改进上尿路尿路上皮细胞癌的诊断，填补诊断空缺。