Bcl-2在家免骨骼肌运隔缺血后处理心肌保护中的作用

摘要

近年来，冠心病已经成为危害我国乃至全世界人类健康的重要疾病之一。虽然经过及时有效的治疗可以减少部分心肌缺血坏死程度，提高患者生存率，但是随之而来的再灌注损伤不可避免，比如：再灌注心律失常、心肌收缩功能障碍、内皮细胞功能障碍、心肌细胞凋亡等。这些损伤直接影响患者治疗效果及预后，因此，寻求有效、合理的治疗措施以减少再灌注损伤具有重要意义。
　　1986年，Murry等人率先提出了缺血预处理的概念，即冠状动脉反复短暂的缺血可以使心肌在后续更长时间的缺血中得到保护。这种方法提高了心肌对再灌注损伤的耐受性，但是由于心肌梗死发生的不可预知性，在临床上应用受到限制。2003年，Zhao等在犬的试验中发现，心肌缺血发生后，再灌注前给予冠脉几次短暂、反复缺血再灌注也可以减少心肌梗死面积，减轻再灌注损伤，并称之为缺血后处理。
　　随后，大量、多种属动物模型实验证实缺血后处理和预处理一样具有心肌保护作用；不同种属动物的不同器官(如脑、肝、肾)也被证实有不同程度的心肌保护作用。近几年，随着研究的不断深入，远隔缺血后处理的研究已经从脑、肝、肾等重要脏器发展到骨骼肌这种操作简单、安全的组织。已有研究证实骨骼肌后处理可以减少心肌细胞凋亡，减轻再灌注损伤。但是这种保护作用的机制以及Bcl-2在骨骼肌远端后处理中的作用研究较少，本实验预对此问题进行研究。
　　目的：观察骨骼肌远隔后处理对缺血再灌注的心肌是否有保护作用及Bcl-2是否是远隔缺血后处理的保护因子。
　　方法：18只健康雄性新西兰大白兔(购于河北医科大学动物实验中心)随机分为3组，每组6只。
　　1)缺血对照组(Con)：开胸暴露心脏，于冠状动脉左室支中点处结扎45分钟，随后再灌注120分钟；
　　2)骨骼肌缺血后处理组(Remote Postconditioning，RPostC)：于冠脉缺血39分钟时闭塞双侧髂外动脉5分钟，再灌注1分钟，随后与心肌同时再灌注120分钟；
　　3)HA14-1+骨骼肌后处理组(HA14-1+RPostC)：在冠脉缺血前30分钟腹腔内注射选择性Bcl-2抑制剂HA14-1(2mg/Kg)，冠脉缺血39分钟时闭塞双侧髂外动脉5分钟，再灌注1分钟，然后与心肌同时再灌注120分钟。
　　本实验采用在体兔心脏开胸暴露冠状动脉的左室支，于左心耳下缘与心尖连线中点处穿线结扎冠脉左室支45分钟，再灌注120分钟的方法制备在体兔心肌缺血-再灌注模型；采用游离双侧髂外动脉并用动脉夹短暂闭塞、开放固定部位的方法制备骨骼肌缺血后处理模型。采用伊文思蓝(Evans)标记心肌缺血范围，以2，3，5-氯化三苯基四氮唑(TTC)标记心肌梗死范围，并采用面积计算和重量测量两种方法计算心肌缺血区和心肌梗死区的范围。分别于缺血前、缺血45分钟、再灌注60分钟及再灌注120分钟经颈动脉采血、离心、化学法测定血清肌酸激酶(CK)及乳酸脱氢酶(LDH)。
　　结果：
　　1各组动物血流动力学及基础值指标
　　1.1血流动力学指标
　　各组实验动物缺血前、缺血45分钟、再灌注60分钟及再灌注120分钟时心率(HR)及平均动脉压(MAP)均无统计学差异(P＞0.05)。
　　1.2基础值指标
　　各组动物的体重(G)、左室重量(LV)、缺血区重量(IZg)以及左室支结扎造成的心肌缺血程度之间无统计学差异(P＞0.05)。
　　2心肌缺血及梗死范围
　　2.1各组缺血范围的比较
　　缺血区范围用缺血区与左心室面积比及重量比两项指标来测定。用IZ/LVs表示缺血区/左心室面积比，用IZ/LVg表示缺血区/左心室重量比。
　　与Con组相比，RPostC组及HA14-1+RPostC组缺血区范围(IZ/LVs、IZ/LVg)均未见统计学差异(P＞0.05)。
　　2.2各组梗死范围的比较
　　梗死范围大小用心肌梗死区与缺血区面积比及重量比来表示。分别用NZ/IZs、NZ/IZg表示面积比及重量比。RPostC组与Con组相比，心肌梗死区面积比(NZ/IZs)明显减少(28.17(8.36)vs.64.25(19.40)，P＜0.05)；HA14-1+RPostC组与RPostC组相比，心肌梗死面积比增加了(67.82(11.69)vs.28.71(8.36)，P＜0.05)；而Con组与HA14-1+RPostC组间无统计学意义(P＞0.05)各组间心肌梗死区重量比(NZ/IZg)均未见统计学意义(P＞0.05)。
　　3 CK及LDH的变化
　　与缺血对照组(Con)相比，骨骼肌后处理组(RPostC)再灌注60分钟及120分钟时LDH有减少趋势，但未到达统计学意义。各组间CK未见统计学意义(P＞0.05)。
　　结论：
　　1本实验发现，再灌注早期给予家兔双下肢短暂缺血再灌注可以减少心肌梗死面积，减轻心肌再灌注损伤。
　　2骨骼肌远隔缺血后处理减少心肌梗死面积可能是通过Bcl-2介导的。