γ干扰素诱导蛋白-10及其受体在各型慢性乙型肝炎的表达和意义

摘要

目的：乙型病毒性肝炎是由乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus，HBV)感染引起的、以肝脏炎性病变为主并可引起多器官损害的一种传染病。本病呈世界流行性。乙型肝炎的发生发展机制现在尚不十分明确，目前认为免疫损伤在其中起着重要作用，肝脏病变呈现肝细胞变性、坏死和炎性细胞浸润为主的明显炎症特征。
　　趋化因子是具有吸引白细胞移行到感染部位的一些低分子量(多为8-10KD)的蛋白质。当趋化因子与其相应受体结合后，能使多种炎性细胞发育、成熟、趋化、游走，在炎症部位聚集、活化，从而释放炎性因子，介导炎症反应，在机体抗感染、抗病毒等过程中起重要作用，也参与血管再生、组织损伤与修复、肿瘤的生长及转移。γ干扰素诱导蛋白-10(interferon-gamma inducible protein-10，IP-10)属于CXC趋化因子亚家族，通过与其唯一受体CXCR3作用趋化炎性细胞。研究显示，机体对HBV的免疫反应以Th1细胞性炎症反应为主。Th1细胞表达趋化因子受体CXCR3和CCR5。IP-10水平增高可使具有CXCR3受体的T淋巴细胞经血循环聚集到免疫反应部位，通过与其受体的相互作用进一步使T细胞参与组织损害过程。研究证实，在肝脏中，肝实质细胞是产生IP-10的主要来源。肝实质细胞对趋化因子的分泌是感染部位吸引效应细胞的一种方式，并可使效应细胞停留于肝脏中。目前研究表明，IP-10在慢性丙型肝炎患者外周血和肝内表达升高，且外周血IP-10水平与患者肝脏炎症坏死程度相关；在接受抗病毒治疗后IP-10表达降低，基线IP-10的水平可预测抗病毒治疗的反应。目前研究显示，IP-10参与乙型肝炎的慢性化，但在疾病进展中的研究较少，目前尚不能做出定论。
　　本实验通过观察各型慢性乙型肝炎和肝硬化失代偿期患者血清IP-10水平结合肝组织IP-10及其受体CXCR3表达，以探讨IP-10及其受体CXCR3在各型慢性乙型肝炎发病中的变化特点和临床意义。
　　方法：
　　1、研究对象：收集2010年12月-2011年12月我院门诊和住院的慢性乙型肝炎患者38例(分为轻中度组20例，重度组18例)，肝硬化(Liver Cirrhosis，LC)失代偿期患者18例，慢性乙型重型肝炎患者(chronic severe hepatitisB，CSHB)40例。CSHB患者依据治疗前MELD评分分为MELD＞30组(27例)和MELD＜30组(13例)。临床诊断均符合2000年《病毒性肝炎防治指南》和2010年中国《慢乙肝防治指南》。收集同时期内本院健康体检者15名作为对照组。
　　2、标本采集与保存：清晨取全血3ml，室温静置30分钟，然后1500r/min离心15分钟，取上清，分装，-80℃保存，以备检测。肝组织经肝穿刺取出后，放入中性甲醛液保存，石蜡包埋。
　　3、应用全自动生化分析仪检测患者肝功能和肾功能，全自动血凝仪检测凝血功能；ELISA检测HBV血清标志物和抗-HAV、抗-HCV、抗-HDV、抗-HEV、抗-HIV；定量PCR检测血清HBVDNA载量。
　　4、采用双抗体夹心ELISA检测血清IP-10。
　　5、采用免疫组化Power VisionTM法对肝组织进行IP-10和CXCR3的免疫组化染色，棕黄色着色为阳性表达，应用多功能病理图像分析仪半定量分析，计算平均面密度。
　　6、应用SPSS13.0统计软件对实验数据进行统计学分析。
　　结果：
　　1、各组患者血清IP-10水平的比较
　　与对照组(78.58±40.32)相比，CHB轻中度组(200.40±94.95)、CHB重度组(531.52±156.58)、CSHB组(717.96±173.85)血清IP-10水平依次升高(F=9.695，P＜0.05)，CHB重度组与LC失代偿期组(471.10±239.13)差别无统计学意义(P＞0.05)。
　　CSHB患者血清IP-10水平MELD＞30组(815.69±91.83)高于MELD≤30组(669.10±185.60)(t=2.579，P＜0.05)。
　　动态观察2例CSHB好转患者血清IP-10水平随着病情好转而下降，动态观察3例CSHB恶化患者血清IP-10水平随病情恶化而升高。
　　2、肝组织IP-10和受体CXCR3的表达
　　肝组织IP-10主要表达于肝细胞、胆管上皮细胞、窦状内皮细胞胞浆内，且主要聚集于坏死的肝细胞区；受体CXCR3广泛表达于浸润的淋巴细胞和肝细胞，且于汇管区、坏死的肝细胞区及纤维组织增生区表达增强。肝组织IP-10和CXCR3表达均随着炎症程度和纤维化程度的加重表达升高。
　　3、相关性分析
　　3.1血清IP-10水平与生化学指标的相关性
　　各型慢性乙型肝炎患者血清IP-10与ALT(r=0.683，P=0.008)，AST(r=0.426，P=0.006)，TB(r=0.383，P=0.001)呈正相关，与PTA(r=-0.622，P=0.001)呈负相关性。
　　3.2血清IP-10水平与皿VDNA的相关性
　　CHB患者血清IP-10与HBVDNA(r=0.469，P=0.005)明显相关。
　　3.3肝组织IP-10和受体CXCR3的表达的相关性
　　肝组织IP-10和受体CXCR3的表达(r=0.631，P=0.005)呈正相关
　　结论：
　　1、血清IP-10水平在CHB轻中度组、CHB重度组、CSHB组顺序依次升高，并且与ALT、AST、TB呈正相关，与PTA呈负相关，提示血清IP-10水平可作为肝脏损伤严重程度的预测指标。
　　2、肝组织中IP-10主要表达在肝细胞胞浆内，其表达高低与肝组织炎症纤维化程度有关。受体CXCR3广泛表达于淋巴细胞和肝细胞，且于门管区及肝细胞坏死、纤维组织增生区表达增强。肝组织IP-10和CXCR3表达均随着炎症程度和纤维化程度的加重表达升高。表明IP-10参与HBV感染后肝脏的免疫病理损伤。
　　3、CSHB患者血清IP-10水平与MELD相关，随病情变化而变化，可能影响患者预后，仍需进一步研究，以明确是否能作为检测病情变化、评判预后的指标。