1型糖尿病大鼠肾组织PEDF、VEGF的表达变化及坎地沙坦干预研究

摘要

目的:应用链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病大鼠模型，以了解其肾脏组织中PEDF、VEGF的表达水平。同时观察坎地沙坦干预对肾脏PEDF、VEGF表达的影响，探讨PEDF、VEGF在糖尿病肾病(DN)中的作用以及坎地沙坦对肾脏发挥保护作用的可能机制。
　　 方法:雄性Wistar大鼠36只，体重160-200g，随机分3组，其中正常对照组(NC组)12只，糖尿病组（DM组）12只，坎地沙坦干预组(DM-C组)12只。大鼠禁食12h后，DM组、DM-C组给予一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)50mg/Kg以诱导1型糖尿病大鼠的模型;NC组大鼠仅给予腹腔注射等体积的柠檬酸缓冲液。72小时后用血糖仪测定大鼠尾尖部血糖，随机血糖大于16.7mmol/L视为糖尿病大鼠造模成功;给予DM-C组大鼠坎地沙坦5mg·kg-1·d-1灌胃，而NC组和DM组仅等容积生理盐水灌胃。干预12周末，用代谢笼收集大鼠24h尿液，记尿量，测定24小时尿白蛋白排泄量(urinary albumin excretion，UAE);全部大鼠记录体重后留取血标本，测大鼠空腹血糖(fasting blood glucose，FBG)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN);切取右肾后，去掉被膜，并称重，光镜及透射电镜下观察肾脏的形态学变化，免疫组化法观察肾小球和肾小管PEDF和VEGF的蛋白表达水平;快速切取左肾，并分装，将其置于-70℃冰箱中保存，RT-PCR方法检测肾组织PEDF及VEGF的mRNA表达水平。
　　 结果:实验结束时NC组、DM组、DM-C组大鼠分别存活12只、10只、9只大鼠。
　　 1、空腹血糖(FBG)、体重(BW):DM组和DM-C组大鼠的FBG、BW较NC组大鼠显著升高，差异有统计学意义（P均＜0.01），而DM组与DM-C组大鼠FBG、BW差异无统计学意义（P均＞0.05）。
　　 2、各组大鼠肾功能(Scr、BUN)、KW/BW、UAE的比较:与NC组相比，DM组和DM-C组大鼠Scr、BUN明显增加，差异均有统计学意义（P均＜0.01）。DM-C组大鼠的Scr、BUN与DM组相比，差异无统计学意义（P均＞0.05）。与NC组大鼠相比，DM组和DM-C组KW/BW明显增高，24小时UAE明显增多，差异均有统计学意义（P均＜0.01），DM-C组较DM组KW/BW明显减小，24小时UAE明显减少，差异均有统计学意义(P＜0.05，P＜0.01)。
　　 3、免疫组化:①NC组肾小球及肾小管均可见大量的PEDF表达，主要集中于肾小球系膜区和基底膜区域。而DM组和DM-C组肾小球和肾小管PEDF的表达较NC组明显减少（P均＜0.01）;DM-C组PEDF的表达较DM组明显增多(P＜0.01)。②NC组大鼠的肾小球及肾小管仅见极少的VEGF表达，而DM组、DM-C组大鼠的肾小球及肾小管VEGF的表达显著增加(P＜0.01);DM-C组肾小球和肾小管中VEGF的表达较DM组明显减少(P＜0.01)。
　　 4、肾脏病理形态学改变:HE染色和PAS染色中NC组肾小球及肾小管均未见明显异常。HE染色:与NC组相比，DM组和DM-C组大鼠肾小球和肾小管结构紊乱，肾小球肥大，系膜区扩张，部分肾小球出现体积缩小，部分肾小管萎缩;PAS染色:与NC组相比，DM组和DM-C组大鼠肾小球内PAS阳性染色增强，说明肾小球系膜区增宽，基底膜增厚。透射电镜显示DM组和DM-C组大鼠肾小球的基底膜增厚，足突融合、破坏。与DM组相比，DM-C组上述病理改变均明显改善。
　　 5、肾组织PEDF、VEGF的基因表达:①DM和DM-C组大鼠的肾脏PEDF的mRNA表达水平较NC组大鼠明显减少(P＜0.01);而DM-C组大鼠肾脏PEDF的mRNA表达水平较DM组大鼠明显增加(P＜0.05)，但仍少于NC组(P＜0.01)。②DM组和DM-C大鼠肾脏VEGF的mRNA表达水平较NC组大鼠显著增加(P＜0.01);DM-C组大鼠肾脏VEGF的mRNA表达水平较DM组大鼠显著减少（P＜0.05），但仍高于NC组(P＜0.01)。
　　 6、Pearson相关分析显示:大鼠肾脏PEDF的基因表达水平与24小时UAE呈显著负相关(r=-0.696，P＜0.01)，VEGF的基因表达水平与24小时UAE呈显著正相关(r=0.767，P＜0.01)。
　　 结论:
　　 1、糖尿病大鼠肾组织PEDF的表达明显减少，而VEGF的表达明显增多，同时伴有24小时尿白蛋白排泄量的增加、肾功能的异常。
　　 2、坎地沙坦可降低糖尿病大鼠24小时尿白蛋白排泄量，减轻肾脏的病理损伤。
　　 3、坎地沙坦可通过上调糖尿病大鼠肾组织PEDF的表达，下调VEGF的表达，维持PEDF与VEGF的动态平衡，从而发挥肾脏保护作用。

目录

声明

摘要

前言

材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

3 观察和指标检测

4 统计学处理

结果

1 大鼠一般情况和特征

2 各组大鼠血糖、体重的比较(FBG、BW)

3 各组大鼠肾功能(Scr、BUN)、KW／BW、UAE的比较

4 肾脏病理形态变化

5 肾脏PEDF及VEGF的免疫组化半定量分析

6 肾脏PEDF、VEGF的mRNA表达

7 Pearson相关分析

附图

附表

讨论

1 VEGF与糖尿病肾病

2 PEDF与糖尿病肾病

3 PEDF与VEGF的表达失衡与糖尿病肾病

4 RAS与糖尿病肾病

5 坎地沙坦对糖尿病大鼠的肾病保护作用

结论

参考文献

综述

致谢

个人简历