羊膜软组织填充材料对神经卡压松解术后作用的实验研究

摘要

目的:通过建立SD大鼠坐骨神经慢性卡压模型，研究羊膜软组织填充材料对神经卡压松解术后的作用及影响。通过观察相应的指标，判断该材料能否有效预防卡压段神经与周围组织粘连及促进神经再生。
　　 方法:1实验分组:取成年雌性SD大鼠64只，体重250-300克，随机分为2组，每组32只。A组为对照组，单纯解除卡压;B组为实验组，解除卡压后应用羊膜软组织填充材料包裹卡压部位。2动物模型:采用Mackinnon所设计的大白鼠坐骨神经慢性卡压模型，卡压2周后采用两种不同的处理方法进行实验研究。3手术方法:将实验动物称重后，腹腔内麻醉，术区备皮，俯卧位固定，消毒，铺单，于单侧（右侧）股后外侧做平行于股骨干的切口，长度约2.5cm，暴露坐骨神经，用游标卡尺测量其直径（平均为1.25mm）。选用内径为1.2mm的硅胶管，取0.5cm长，纵行剖开后套在离梨状肌下缘约1.0cm处的坐骨神经上，用7-0无创伤缝线缝合硅胶管2针，注意勿将硅胶管与神经缝合到一处，生理盐水冲洗后滴入庆大霉素注射液0.4ml，预防感染。缝合肌层及皮肤，切口碘伏涂搽后，不覆盖任何辅料，置于饲养笼中自然苏醒。术后不制动，任其自由活动。常规饲养两周后，行肌电图检查，证实神经传导速度下降，A、B两组按上述术式行2次手术。4检测方法及指标:(1)大体观察:观察大鼠切口愈合情况，排异反应（术后创面肿胀、炎症等局部症状），有无足底溃疡形成及自噬现象，行动时是否有跛行现象以及术后恢复情况;观察大鼠的毛色改变及小腿肌肉萎缩情况，羊膜软组织填充材料吸收情况;卡压段神经直径大小、外膜厚度的变化;神经与局部组织粘连情况，分离神经时渗血及神经活动度等情况。(2)神经电生理测定:术后2、4、6、8周两组各随机抓取8只大鼠行双侧坐骨神经肌电图检查，在相同的刺激频率(1HZ)和持续时间(0.02ms)下，测得坐骨神经的神经传导速度(MNCV)、复合肌肉动作电位(CMAP)波幅以及末梢潜伏期，在健侧坐骨神经相同位置亦测定相同指标。计算术侧坐骨神经CMAP波幅及末梢潜伏期占正常侧的百分比，即术侧坐骨神经CMAP波幅恢复比和末梢潜伏期延迟比。(3)组织学观察:包括光镜和电镜观察。术后4周、8周（取4只）标本用10％福尔马林固定24小时后，脱水，石蜡包埋，切片，干燥后行HE染色，然后在光镜下观察变性的神经纤维数量、髓鞘的厚度以及束间结缔组织与血管的增生状况等;术后8周（剩余4只）标本在电镜下观察神经髓鞘的厚度及其板层的结构、神经轴索直径、雪旺氏细胞(Schwanncell，SC)、微丝、微管、线粒体等超微结构变化。(4)三头肌湿重恢复率:神经电生理检查结束后，从小腿三头肌肌肉起止点处取下双侧三头肌，剥离掉肌肉表面的脂肪和筋膜，用分析天平（万分之一）称重，记录结果，并计算出三头肌湿重恢复率，即术侧肌肉湿重相对于健侧肌肉湿重的百分比。5、统计学处理:应用统计软件SPSS13.0进行统计分析，计量资料用均数±标准差((X)±S)表示，两组均数间的比较采用两样本t检验;推断等级资料的两个独立样本所来自的两个总体分布位置是否有差别，采用两个独立样本比较的Wilcoxon秩和检验。检验水准α=0.05。
　　 结果:1大体观察:实验动物切口全部Ⅰ期愈合，无一例感染发生，无红肿等炎症表现，无自噬及足趾脱落现象发生。神经卡压2周后右下肢毛色发黄，光泽度降低，足趾主动伸展功能受限，并出现跛行，小腿后群肌肉萎缩明显，但无足底溃疡发生。去除卡压物后，可见卡压段神经颜色较苍白，质地较硬，直径明显变细，外膜增厚，卡压处远、近端神经增粗明显，呈神经瘤样改变。松解术后，随着时间的延长，两组神经增粗段逐渐变细，卡压段神经逐渐增粗，神经外膜亦逐渐变薄，直至接近正常。取材时羊膜软组织填充材料吸收不明显，至8周时仍有存留。与对照组相比，实验组动物坐骨神经在各时间段与局部组织粘连较轻，容易钝性分离，分离神经时渗血较少，神经活动度也较好(P＜0.05，秩和检验)。2神经电生理测定:模型卡压2周后，术侧坐骨神经神经传导速度平均为11.65±1.00m/s。两组在松解术后神经传导速度、复合肌肉动作电位波幅以及末梢潜伏期均有不同程度恢复，但均未恢复至正常值。实验组MNCV、CMAP波幅恢复比和末梢潜伏期延迟比均比对照组恢复得好(P＜0.05，t检验)。至第8周时，实验组神经传导速度达到45.16±1.91m/s，而对照组神经传导速度仅达到32.60±3.57m/s;复合肌肉动作电位波幅恢复比:实验组为83.89±1.94(％)，对照组为61.96±2.69(％);末梢潜伏期延迟比:实验组为1.30±0.06对照组为1.48±0.06。3组织学观察。光镜下观察:与对照组相比，实验组表现为有髓神经纤维数目较多，且较粗大的神经纤维数量比例较高，髓鞘也较厚，变性的神经纤维数目较少，结缔组织增生较轻，血运也较丰富。术后8周对照组变性的神经纤维数目(28.6±1.4)与实验组(23.9±1.2)相比，差别有统计学意义(P＜0.01)。电镜下观察:术后8周对照组可见再生的有髓神经纤维较多，轴索较细，排列较规则，髓鞘增生不规则，厚薄不均，甚则变形、分层，部分髓鞘肿胀、溶合明显，仍可见到髓鞘局限性塌陷和脱落现象，偶可见到线粒体髓样化，结缔组织增生仍比较明显;实验组表现为有髓纤维再生显著，排列规则，呈束状成长，髓鞘明显增厚，厚薄较一致，板层结构较清晰，髓鞘轻度肿胀，未见到髓鞘塌陷、脱落现象，轴索直径较大，结缔组织增生不明显，时可见到雪旺氏细胞、线粒体、微丝、微管等。4三头肌湿重恢复率:术后各时间段，实验组三头肌湿重恢复率均较对照组为好(P＜0.05，t检验)。至第8周时，实验组已达90.55±4.03(％)对照组仅为79.53±4.01(％)。
　　 结论:1羊膜软组织填充材料应用于SD大鼠坐骨神经卡压松解术后，可有效预防神经与周围组织粘连，避免了神经松解术后神经裸露造成的过敏现象。2该材料的应用使神经具有一定的活动度，减轻了因粘连造成的神经表面血管受压现象，继而可促进神经的再生。

目录

声明

摘要

前言

材料与方法

1 材料

2 方法

结果

3．1 大体观察

3．2 神经电生理测定

3．3 组织学观察

附图

附表

讨论

4．1 周围神经卡压的概念

4．2 周围神经卡压后的病理变化

4．3 周围神经的再生、修复及影响因素

4．4 羊膜的特性

4．5 羊膜软组织填充材料的特点及防粘连机制

结论

参考文献

综述 周围神经卡压诊治的研究进展

致谢

个人简历