不同级别恶性胶质瘤中GaINAC-T14的表达差异及其与胶质瘤恶性度的关联

摘要

目的:脑胶质瘤（脑胶质细胞瘤）起源于神经外胚层，约占颅内肿瘤的46％，是最常见的颅内恶性肿瘤。按照2000年WHO标准病理分级标准可以划分4级:Ⅰ级为毛细胞型星形胶质瘤，占胶质瘤的5％左右;Ⅱ级为扩散型星形胶质瘤，占胶质瘤的30～40％左右;Ⅲ级为间变型星形胶质瘤，约占15～25％左右，一般由Ⅱ级演变而来;Ⅳ级为胶质母细胞瘤，占胶质瘤的30％左右。据相关文献报道，脑胶质瘤的发病率为3～10人/10万人，占全身恶性肿瘤的1％～3％，手术加放化疗的平均生存期仅为8～11个月，每年恶性脑胶质瘤无情地夺去18～60万中青年人的宝贵生命，且呈逐年增长趋势。因此，对于胶质瘤的研究是一个非常重要的课题。随着研究的进展，人们将会对胶质瘤的发生发展机制更加的了解，并为新型的抗肿瘤药物研发提供理论基础。
　　 GalNAc-T14是近几年才被发现的糖基转移酶，属于GalNAc-T家族中的新成员。在粘蛋白O-糖基化过程中，GalNAc-T被认为是起第一位作用的酶，而且在肿瘤细胞中人们观察到GalNAc-T的糖基化作用发生了改变。研究发现糖基化是肿瘤细胞的共性。正常细胞间的识别和联系由于细胞膜上糖蛋白糖链的异常改变而发生障碍，同时肿瘤细胞的无限制增殖及较强的转移能力以及侵袭正常细胞和破坏组织的能力也与细胞表面的糖链密切相关。GalNAc-T14的C末端蛋白结构域呈现典型的蓖麻样形状，近年发现，该结构域能够影响粘蛋白O-糖基化的过程从而对肿瘤的发生发展起到一定的作用。前期我们已经进行过IGFBP-3抑制ERK信号转导通路的激活，促进胶质瘤细胞凋亡的相关研究。近来有文献报道GalNAc-T14能影响一些抑癌因子的促凋亡作用，从而对肿瘤细胞的生长起着重要的调节作用。如肾肿瘤细胞株786-O中GalNAc-T14对IGFBP-3的促凋亡作用。可见GalNAc-T14与IGFBP-3相互作用对肿瘤细胞的凋亡和增殖起着重要的调节作用。可见GalNAc-T14与肿瘤的发生、发展有一定关联性，但是具体作用还有待进一步阐释。
　　 本研究通过Q-PCR和免疫组织化学染色方法检测GalNAc-T14在正常脑组织及不同级别恶性胶质瘤中的表达情况，阐释GalNAc-T14在正常脑组织及不同级别恶性胶质瘤中的表达差异及其与胶质瘤恶性的关联性，为进一步探索GalNAc-T14在胶质瘤中的作用及详细的生物学机制提供理论基础，为临床胶质瘤的治疗提供新的思路。
　　 方法:
　　 1临床标本的采集:从河北医科大学附属第二医院神经外科采集近两年的不同级别的脑胶质瘤及正常脑组织的标本。以2000年WHO标准病理分级为标准，采集Ⅱ-Ⅳ级的脑胶质瘤标本共34例，其中Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级星形细胞胶质瘤标本分别为11例、14例、9例，同时取正常脑组织标本16例（对照用）。
　　 2临床标本的检测与分析:采用Q-PCR技术从mRNA水平定量检测GalNAc-T14在正常脑组织及不同级别胶质瘤的表达情况。同时运用免疫组织化学染色技术从蛋白水平检测GalNAc-T14在正常脑组织及不同级别胶质瘤中的表达情况。
　　 3应用spss17.0统计学软件对实验数据进行统计学分析。
　　 结果:
　　 1应用Q-PCR方法，在经过对实验组脑胶质瘤及正常脑组织标本细胞总RNA进行提取、纯度检测(A260/A280＞1.8)、完整性鉴定(28s和18sRNA清晰带)、扩增目的基因GalNAc-T14及带荧光的扩增酶标记过程后，应用spss17.0统计学软件进行统计学分析结果显示，GalNAc-T14在胶质瘤细胞组中的表达与正常脑组织组相比明显降低，且P值均小于0.05，差异有统计学意义;组间比较显示在不同级别星型胶质瘤细胞中(Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级)GalNAc-T14的表达随着恶性度的增加呈现递减趋势，差异有统计学意义，P值均小于0.05。上述研究结果在基因水平上表明，脑胶质瘤中GalNAc-T14的表达水平较正常脑组织明显降低，且胶质瘤的恶性度越大表达水平越低，呈现递减趋势。
　　 2用免疫组织化学方法对经过4％多聚甲醛溶液固定的脑胶质瘤标本以及正常脑组织标本进行分析，表达GalNAc-T14的阳性细胞呈现棕色。应用spss17.0进行统计分析结果显示，脑胶质瘤细胞中的GalNAc-T14表达水平均明显低于正常脑组织，P值小于0.05，差异有统计学意义。在不同级别的脑胶质瘤细胞中，GalNAc-T14的表达存在差异，且P值小于0.05，有统计学意义。上述结果从蛋白水平表明，GalNAc-T14在脑胶质瘤中的表达与正常脑组织存在差异，并且随着胶质瘤的恶性进展逐渐递减。
　　 结论:
　　 1GalNAc-T14在恶性胶质瘤细胞中的表达水平降低，并且在不同级别胶质瘤细胞中的表达水平存在明显差异，随着胶质瘤恶性度的增高呈现递减趋势，与病情进展密切相关。
　　 2GalNAc-T14异常的糖基化改变可以促进胶质瘤细胞的生长和增殖作用，但通过与IGFBP-3结合，使IGFBP-3糖基化，对胶质瘤细胞发挥促凋亡作用，从而有效地抑制胶质瘤的恶性进展。

目录

声明

摘要

前言

材料与方法

1 实验材料

2 临床标本的采集及分组

3 实验方法

结果

1 脑胶质瘤细胞中Ga1NAc-T14在mRNA水平上的表达情况

2 脑胶质瘤细胞中Ga1NAc-T14在蛋白水平的表达情况

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述

致谢

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