不同压力高压氧对实验性脑出血大鼠出血灶周围水肿及AQP4表达的影响

摘要

目的:
　　 高压氧(Hyperbaricoxygen，HBO)治疗是指机体暴露在超过一个大气压的环境中呼吸纯氧的治疗方法和过程，利用氧的物理、化学、生物及生理作用而达到治疗疾病的目的。脑出血(Intracerebralhemorrhage，ICH)占所有脑血管病的21％～48％，是神经系统的多发病和常见病，大部分的脑出血主要靠药物治疗，部分患者需要实施外科手术，但到目前为止并没有任何一种药物或手术可以使患者完全康复。脑水肿是脑出血后最主要的继发性病理生理改变，有效治疗脑水肿是减轻继发性脑损害、促进神经功能缺损恢复的重要措施。有临床研究表明HBO可减轻脑出血后继发的脑水肿，有利于患者神经功能的恢复，但目前尚缺乏循证医学证据。
　　 水通道蛋白是一种介导生物膜内外水转运的膜蛋白，在不同的组织器官中其表达具有特异性。水通道蛋白-4（Aquaporin-4，AQP4）主要分布于脑组织中，丰富表达在毛细血管、血管周围及软脑膜所直接接触的胶质细胞上。近年研究表明AQP4与脑外伤和缺血性脑卒中引起的脑水肿有一定的相关性。有动物研究发现，HBO可有效的减轻ICH后出血灶周围脑水肿，并且其机制可能与降低出血灶周围AQP4的表达水平有关。
　　 本实验采用胶原酶诱导法建立大鼠ICH模型，应用不同绝对大气压(Atmosphereabsolute，ATA)的HBO治疗对其进行干预，并测定大鼠出血灶周围脑组织水含量及AQP4的表达水平，进一步证明HBO对ICH后出血灶周围水肿的影响及其可能机制，并探讨何种压力的HBO更适合ICH的治疗。
　　 方法:
　　 1、实验动物分组:将96只SD(Sprague-Dawley)大鼠随机分为正常对照组(Normal)6只;脑出血对照组(ICH)18只:仅为脑出血模型，不作任何处理;常压氧治疗组(ICH+1.0ATA)18只;高压氧治疗组54只，再按不同的治疗压力分为ICH+1.8ATA组、ICH+2.0ATA组、ICH+2.2ATA组3个亚组，每组18只。各治疗组于ICH模型制备后24小时（制模不成功者除外）按不同治疗压力给予HBO/常压氧治疗，1次/天。常压氧治疗组与高压氧治疗组除治疗压力不同外，其余均在同一实验条件下吸浓度约为90％的氧气，对照组不进行HBO/常压氧治疗，各治疗组分别于治疗过程中的第1天、第3天、第5天断头取脑，脑出血对照组也在这三个时间点断头取脑，每个时间点各6只SD大鼠。
　　 2、脑出血动物模型的制备:采用Ⅶ型胶原酶定位注射法建立大鼠尾壳核脑出血模型。
　　 3、神经功能评定:在ICH大鼠模型制备后24小时观察大鼠行为学变化，按LongaFZ评分法评分:0分，无体征;1分，不能完全伸展对侧肢体（左侧）;2分，对侧肢体瘫痪，向对侧转圈，有追尾现象;3分，不能站立倒向对侧;4分，意识障碍。2分以上认为造模成功。
　　 4、高压氧处理:将ICH大鼠置于特制木箱中，将木箱置于高压氧舱内，治疗压力根据分组而定，加压25分钟后，采用流量为10L/min的直排式给氧5分钟（实验前曾测试给氧5分钟后出气口氧浓度为90％左右），稳压吸氧60分钟，之后停止供氧，开始匀速减压(速率约为0.01Mpa/min)，减压时间为30分钟，1次/天。常压氧治疗组不予加压，其余实验条件与高压氧治疗组相同。脑出血对照组不进行HBO/常压氧治疗。
　　 5、采用干湿比重法测定脑组织水含量，免疫组化ABC法测定出血灶周围AQP4的表达。
　　 结果:
　　 1、脑组织水含量的测定:脑出血大鼠的脑组织水含量在出血后3天达到峰值，至出血后5天有所下降。常压氧治疗组较脑出血对照组减少，但各时间点比较差异均无统计学意义(P＞0.05)。各高压氧治疗组较常压氧治疗组及脑出血对照组相比脑组织水含量减少，于1天时2.0ATA组与常压氧治疗组及脑出血对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);于3天、5天时各高压氧治疗组与常压氧治疗组及脑出血对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05)，但2.0ATA组较1.8ATA组及2.2ATA组减少明显，且比较差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　 2、出血灶周围AQP4的表达:脑出血大鼠的出血灶周围脑组织AQP4表达在出血后3天达到峰值，至出血后5天有所下降。常压氧治疗组较脑出血对照组表达减少，但各时间点比较差异均无统计学意义(P＞0.05)。各高压氧治疗组较常压氧治疗组及脑出血对照组表达减少，于各时间点比较差异均有统计学意义(P＜0.05)，但于3天、5天时2.0ATA组较1.8ATA组及2.2ATA组减少明显，且比较差异有统计学意义（P＜0.05）。
　　 结论:
　　 本实验采用胶原酶诱导法建立大鼠ICH模型，应用不同压力的HBO治疗对其进行干预，并测定大鼠出血灶周围脑组织水含量及AQP4的表达水平，证明出血灶周围脑组织水含量与AQP4的表达存在一定的相关性，高压氧和常压氧治疗有利于减轻ICH后脑水肿，高压氧治疗效果优于常压氧，且在1.8ATA、2.0ATA、2.2ATA三个压力中，2.0ATA可能更适合ICH的治疗，其减轻脑水肿的机制可能与降低出血灶周围AQP4的表达水平有关。

目录

声明

摘要

前言

材料与方法

1 材料

2 实验方法

3 分钟→蒸馏水5分钟

结果

1 脑组织水含量测定

2 脑出血灶周围AQP4的表达

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述

致谢

个人简历