多沙唑嗪对映体对动物胃平滑肌收缩功能及α1受体亚型mRNA表达的研究

摘要

多沙唑嗪，作为长效的选择性α1受体阻断药，临床广泛用于治疗高血压疾病。由于α1受体在下尿路分布广泛且参与排尿功能的调节，因此选择性α1受体阻断药包括多沙唑嗪成为治疗良性前列腺增生症的一线用药。多沙唑嗪的化学结构中存在一个手性碳原子，人们已成功分离出多沙唑嗪对映体（左旋多沙唑嗪和右旋多沙唑嗪）。而目前临床使用的为其外消旋体，且临床使用多沙唑嗪为口服剂型，其在吸收入血前可在胃局部形成较高浓度。预实验我们发现多沙唑嗪可明显增强5-HT诱发兔离体胃体纵行平滑肌的收缩反应。而机体95％的5-HT分布于胃肠道内，在胃平滑肌中分布了5-HT1B，5-HT1D和5-HT2B等受体亚型参与调节胃肠功能。同时，目前关于α1受体亚型（α1A，α1B，α1D）在胃平滑肌内的分布报道甚少，并且在长期口服多沙唑嗪后对胃平滑肌中可能存在的α1受体亚型的影响尚无报道。
　　 因此，本研究目的:1）研究多沙唑嗪及其对映体对5-HT诱发的兔离体胃体纵肌收缩反应的作用机制，进一步对5-HT诱发收缩反应的亚型分析;2）研究仅1受体及其亚型mRNA在大鼠胃平滑肌中表达分布特点;3)观察长期给予多沙唑嗪对大鼠胃平滑肌中α1受体及其亚型mRNA表达水平的影响。
　　 第一部分:多沙唑嗪选择性增强5-HT诱发兔胃体纵肌收缩反应及其反应机制的研究
　　 制备兔离体胃体纵行平滑肌标本，标本施予2g前负荷，平衡1h后给药。标本对药物反应通过生理记录仪记录。
　　 1.吲哚美辛及阿托品对5-HT诱发兔胃体纵行平滑肌收缩反应的影响
　　 溶媒对照组中，5-HT重复给药3次均可产生相同的收缩反应量效曲线(P＞0.05)，第2轮与第3轮量效曲线的Emax与-LogEC50均无显著差异（P＞0.05）。
　　 1μmol·L-1阿托品处理标本后，5-HT诱发的兔胃体纵行平滑肌收缩反应无明显变化，处理后5-HT反应量效曲线Emax与-LogEC50与处理前均无显著差异(P＞0.05)。
　　 然而，10μmol·L-1吲哚美辛可以显著抑制5-HT诱发的收缩反应，抑制比率可达95.16±2.01％(P＜0.05)，但对5-HT诱发的收缩反应量效曲线-LogEC50无显著影响(P＞0.05)。
　　 2.不同5-HT受体亚型阻断剂对5-HT诱发兔胃体纵行平滑肌收缩反应的影响
　　 溶媒对照组中，5-HT可诱发产生5轮均相同的收缩反应量效曲线（P＞0.05），第2、3、4、5轮量效曲线Emax与-LogEC50均无显著变化(P＞0.05)。
　　 5-HT3受体阻断剂昂丹司琼(3-30μmol·L-1)及5-HT2B受体阻断剂育亨宾（1-10μmol·L-1）处理标本后，5-HT诱发的兔胃体纵行平滑肌收缩反应量效曲线Emax与-LogEC50与给药前比较均无显著差异(P＞0.05)。
　　 然而，选择性5-HT2A受体阻断剂萘法唑酮(1，10，100nmol·L-1)处理标本后，5-HT诱发的兔胃体纵行平滑肌收缩反应量效曲线平行右移，而Emax值无显著变化(P＞0.05)，Schild作图法计算斜率值为0.982±0.099，经统计学分析符合竞争性拮抗，pA2=8.643±0.175。
　　 3.5-HT受体激动剂及促胃动素激动剂对兔胃体纵行平滑肌的作用
　　 分别加入5-HT1A受体激动剂乌拉地尔（0.1-3μmol·L-1）或促胃动素受体激动剂红霉素（0.1-10μmol·L-1），标本张力均无显著性变化（P＞0.05），即两种激动剂均未使兔胃体纵行平滑肌诱发显著的收缩反应(P＞0.05)。
　　 第二部分:α1受体三种亚型mRNA在大鼠胃不同部位平滑肌表达水平的研究
　　 利用荧光实时定量PCR方法对大鼠贲门、胃底、胃体、胃窦平滑肌中α1受体亚型(α1A，α1B，α1D)mRNA表达水平进行相对定量。
　　 1.大鼠贲门、胃底、胃体、胃窦四个不同部位平滑肌α1A受体mRNA表达水平的对比分析
　　 以大鼠脾组织作为阳性对照，贲门、胃底、胃体和胃窦α1A受体mRNA的表达水平均显著低于脾组织(P＜0.05)，且这四个不同部位之间α1A受体mRNA表达水平亦不相同，胃底与胃体平滑肌组织α1A受体mRNA的表达水平相对较高，贲门、胃窦α1A受体mRNA表达水平显著低于胃体平滑肌组织（P＜0.05）。四个部位胃平滑肌中mRNA表达水平依次为:贲门=胃窦＜胃底=胃体。
　　 2.大鼠贲门、胃底、胃体、胃窦四个不同部位平滑肌α1B受体mRNA表达水平的对比分析
　　 以大鼠脾组织作为阳性对照，贲门、胃底、胃体和胃窦α1B受体mRNA的表达水平均显著低于脾组织(P＜0.01)，但贲门、胃底、胃体及胃窦四个不同部位平滑肌组织之间α1B受体mRNA表达水平无显著性差异（P＞0.05）。
　　 3.大鼠贲门、胃底、胃体、胃窦四个不同部位平滑肌α1D受体mRNA表达水平的对比分析
　　 以大鼠胸主动脉作为阳性对照，贲门、胃底、胃体平滑肌组织α1D受体mRNA的表达水平均显著低于胸主动脉(P＜0.01)，但胃窦平滑肌组织中α1D受体mRNA表达水平较胸主动脉比较无显著性差异(P＞0.05)。且贲门、胃底、胃体平滑肌组织1D受体mRNA的表达水平均显著低于胃窦平滑肌组织(P＜0.01)。贲门平滑肌组织α1D受体mRNA的表达水平亦低于胃体平滑肌组织（P＜0.05）。四个部位表达水平依次为:贲门＜胃底=胃体＜＜胃窦。
　　 第三部分:长期给予多沙唑嗪对大鼠胃平滑肌中α1受体亚型mRNA表达水平的影响
　　 大鼠随机分为对照组、消旋多沙唑嗪（（±）DOX）组、左旋多沙唑嗪((-)DOX)组及右旋多沙唑嗪((+)DOX)组。三组给药组采用灌胃方式分别给予大鼠消旋多沙唑嗪、左旋多沙唑嗪、右旋多沙唑嗪8mg/kg/d，对照组以蒸馏水替代药物。持续给药12w后，处死大鼠，利用荧光实时定量PCR方法分别对四组大鼠贲门、胃底、胃体、胃窦平滑肌中α1受体亚型(α1A，α1B，α1D)mRNA表达水平进行相对定量。
　　 1.多沙唑嗪及其对映体对大鼠贲门平滑肌α1A、α1B、、1D受体mRNA表达水平的影响
　　 与对照组标本相比，（±）DOX组、(+)DOX组、(-)DOX组三组给药组贲门平滑肌标本α1A受体mRNA的表达水平均显著升高（P＜0.01），且(±)DOX组贲门平滑肌标本α1A受体mRNA表达水平高于(+)DOX组和(-)DOX组(P＜0.05)。
　　 （±）DOX组、(+)DOX组、(-)DOX组三组给药组贲门平滑肌标本α1B受体mRNA的表达水平与对照组标本相比无显著性差异（P＞0.05）。
　　 （±）DOX组和(+)DOX组贲门平滑肌标本1D受体mRNA的表达水平较对照组标本显著升高(P＜0.01)。而(-)DOX组贲门平滑肌标本α1D受体mRNA的表达水平与对照组相比无明显差异(P＞0.05)。
　　 2.多沙唑嗪及其对映体对大鼠胃底平滑肌α1A、α1B、1D受体mRNA表达水平的影响
　　 与对照组标本相比，（±）DOX组、(+)DOX组和(-)DOX组三组给药组胃底平滑肌标本α1A受体mRNA的表达水平均显著升高(P＜0.01)，且（±）DOX组胃底平滑肌标本α1A受体mRNA表达水平略高于(+)DOX组和(-)DOX组，但无统计学意义。
　　 （±）DOX组、(+)DOX组、(-)DOX组三组给药组胃底平滑肌标本α1B受体mRNA的表达水平与对照组标本比较无显著性差异(P＞0.05)。
　　 （±）DOX组、(+)DOX组和(-)DOX组胃底平滑肌标本α1D受体mRNA的表达水平均较对照组标本略有下降(P＜0.05）。但三组给药组标本之间α1D受体mRNA表达水平无显著差异(P＞0.05)。
　　 3.多沙唑嗪及其对映体对大鼠胃体平滑肌α1A、α1B、α1D受体mRNA表达水平的影响
　　 与对照组标本相比，（±）DOX组、(+)DOX组和(-)DOX组三组给药组胃体平滑肌标本α1A受体mRNA的表达水平均显著升高(P＜0.01)，且三组给药组间比较，(+)DOX组胃体平滑肌标本α1A受体mRNA表达水平略低于（±）DOX组和(-)DOX组(P＜0.05)。
　　 （±）DOX组、(+)DOX组、(-)DOX组三组给药组标本α1B受体mRNA的表达水平与对照组标本比较无显著性差异（P＞0.05）。
　　 (-)DOX组胃体平滑肌标本α1D受体mRNA的表达水平较对照组标本略有下降(P＜0.05），而(±)DOX组和(+)DOX组标本仅1D受体mRNA表达水平较对照组无显著差异(P＞0.05)。
　　 4.多沙唑嗪及其对映体对大鼠胃窦平滑肌α1A、α1B、1D受体mRNA表达水平的影响
　　 与对照组标本相比，（±）DOX组、(+)DOX组和(-)DOX组三组给药组胃窦平滑肌标本α1A受体mRNA的表达水平均显著升高(P＜0.01)，且三组给药组间比较，(+)DOX组胃窦平滑肌标本α1A受体mRNA表达水平略低于（±）DOX组和(-)DOX组(P＜0.05)。
　　 （±）DOX组、(+)DOX组、(-)DOX组三组给药组胃窦平滑肌标本α1B受体mRNA的表达水平与对照组比较无显著性差异（P＞0.05）。
　　 （±）DOX组、(+)DOX组和(-)DOX组三组给药组标本α1D受体mRNA的表达水平与对照组标本相比无显著性差异（P＞0.05）。
　　 结论:
　　 较高浓度多沙唑嗪及其对映体均可对5-HT受体介导的兔离体胃体纵行平滑肌收缩作用产生非α1受体依赖性的特异性增强效应，(+)DOX与(-)DOX对5-HT诱发的兔胃体纵肌收缩反应的增强效应无显著差异。喹唑啉类α1受体阻断药中的哌唑嗪、阿夫唑嗪和特拉唑嗪均不具有多沙唑嗪样增强效果。5-HT通过5-HT2A受体亚型诱发兔离体胃体纵行平滑肌收缩反应，并且此收缩作用与前列腺素合成存在密切联系。
　　 α1A，α1B，α1D三种受体亚型mRNA在大鼠胃平滑肌均有表达，但表达水平各不相同。α1A受体mRNA在胃底与胃体平滑肌中的表达水平明显高于贲门及胃窦平滑肌，α1D受体mRNA在贲门、胃底、胃体、胃窦平滑肌中表达水平依次升高，而仅1B受体mRNA在四个不同部位中的表达水平无明显差异。
　　 长期给予多沙唑嗪及其对映体使大鼠贲门、胃底、胃体及胃窦平滑肌中α1A受体mRNA表达水平明显上调，且(±)DOX对大鼠胃平滑肌中α1A受体mRNA表达水平的上调作用比(+)DOX和(-)DOX相对较强。而仅对贲门平滑肌α1D受体mRNA表达水平略有上调，对α1B受体mRNA表达水平无显著影响。

目录

声明

摘要

英文缩写

引言

第一部分 多沙唑嗪选择性增强5-HT诱发兔胃体纵肌收缩反应的药理学机制及对5-HT受体亚型的分析

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

第二部分 α1受体三种亚型mRNA在大鼠胃不同部位平滑肌表达水平的研究

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

第三部分 多沙唑嗪长期给药对大鼠不同部位胃平滑肌α1受体三种亚型mRNA表达水平的影响

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

结论

综述 不同5-HT受体亚型在胃肠功能调节中的作用

致谢

个人简历