咯利普兰对佐剂关节炎大鼠肺组织核因子κB的影响

摘要

目的:观察核因子κB(Nuclear factor kappa B，NF-κB)在佐剂关节炎(Adjuvant arthritis，AA)大鼠肺组织中的表达及咯利普兰对其的影响，探讨磷酸二酯酶(Phosphodiesterase，PDE)在类风湿肺发病机制中的作用，为PDE抑制剂治疗类风湿肺奠定理论基础。
　　方法:选清洁级健康、雄性Wistar大鼠，共54只，由河北医科大学实验动物中心提供，体重160g-180g适应性饲养一周后，随机分为:(1)A组（模型组）18只，于造模第1天右后足足跖部皮内无菌注射完全弗氏佐剂（Complete Freund's Adjuvant，CFA）（含卡介苗7.5mg/ml）0.1ml，同时给予生理盐水(0.5ml/d)腹腔注射(2)B组（咯利普兰组）18只，于造模第1天右后足足跖部皮内无菌注射CFA（含卡介苗7.5mg/ml）0.1ml，同时给予咯利普兰溶液(用0.9％生理盐水配制成浓度为0.1 mg/ml，0.5ml/d左右，含咯利普兰0.25mg/kg)腹腔注射。(3)C组（对照组）18只，造模第1天右后足足跖部皮内无菌注射生理盐水0.1ml，同时给予生理盐水腹腔注射(0.5ml/d)。各组大鼠分别于造模第0天，7天，14天，28天用足趾容积测量仪测量左右后足体积，比较各组关节肿胀率;并于造模第7天、14天、28天放血处死大鼠，取其左肺上叶和右肺下叶，4％多聚甲醛溶液进行固定，观察大鼠关节体积变化情况，苏木精-伊红(hematoxylin-eosin，HE)染色及Masson染色，观察各组大鼠肺组织的肺泡炎及纤维化程度，免疫组化检测肺组织中NF-κB的表达。用SPSS20.0统计软件对各组数据进行分析。
　　结果:
　　1.大鼠一般情况造模第1天各组大鼠造模足均出现轻度红肿，肿胀度(％)分别为C组7.46±1.27，A组8.41±1.02，B组8.07±1.56（P＞0田.05）。7、14、28天时A组造模足肿胀度(％)分别为31.54±3.26、49.66±4.03、32.78±3.26，B组分别为24.74±2.27、35.54±2.09、23.87±2.76，C组分别为9.98±1.64、11.16±2.01、11.57±1.09，各时间点肿胀度A组较C组相比增加率差异具有统计学差异(P＜0.05)。B组较C组肿胀程度增加(P＜0.05)，7、14、28天B组较A组肿胀度降低，差异有统计学意义(P＜0.05)。对侧足于造模12天时出现红肿，A组14、28天时肿胀程度(％)分别为25.29±3.72、38.86±3.72，B组分别为17.74±1.77、24.51±3.84，C组(％)分别为10.99±1.38、11.76±1.31，A组较C组增加(P＜0.05)，B组较C组肿胀程度增加(P＜0.05)，14、28天B组较A组肿胀度降低(P＜0.05)。
　　2.肺组织学病理学结果HE染色:A组肺组织7天时，可见肺泡间隔增厚、水肿，中性粒细胞、淋巴细胞、浆细胞等炎性细胞浸润，局部可见红细胞，偶有肺泡腔破坏，14天时肺泡间隔增厚较7天时明显，间质内淋巴细胞、浆细胞浸润明显，可见成纤维细胞增生，肺泡腔破坏、融合，部分呈实变改变，28天时可见肺泡间隔增厚，肺泡破坏、融合明显，少量炎性细胞浸润，7、14、28天肺泡炎评分分别为2.8±0.837、3.67±0.516、2.17±0.753，C组肺泡炎评分各时间段均为1.0±0.0、1.17±0.408、1.0±0.0，A组较C组增加，差异有统计学意义(P＜0.05)，对照组7、14、28天均未见明显肺泡间隔增厚及炎性细胞浸润，B组肺组织各时间段表现介于A组与C组之间，7、14天肺泡炎评分分别为1.83±0.753、2.5±0.548，较C组升高(P＜0.05)，较A组降低(P＜0.05)。
　　肺泡Masson染色:A组7天时可见少量绿色胶原，14天绿色胶原增多，肺泡间隔、肺泡腔内均可见纤维蛋白增多，28天时病变范围扩大，大量胶原纤维增生、沉积。C组7、14、28天时均可见少量绿色基质胶原，分布于大气道和血管壁周围，B组表现介于对照组与模型组之间。纤维化评分7天时A组、B组、C组分别为1.2±0.447、1.0±0.0、1.17±0.408，均无明显差别(P＞0.05)，14天、28天时A组的纤维化评分分别为2.5±0.548、3.33±0.817，C组分别为1.0±0.0、1.17±0.408，A组均显著高于C组(P＜0.05)，B组14天、28天时纤维化评分分别为2±0.632、1.8±0.837，均较C组升高(P＜0.05)，28天时纤维化程度较A组减轻(P＜0.05)。
　　3.肺组织NF-κB的表达A组肺组织中NF-κB表达增多，7天时表达强度最高，IOD值为170657.84±2422.13，肺泡上皮细胞、支气管上皮细胞、肺泡巨噬细胞均可见胞浆和细胞核内黄色或棕黄色颗粒，以细胞核染色为主，14天、28天时NF-κB表达强度较前有所下降，IOD值分别为123337.58±2590.75、74002.79±3731.36，C组7、14、28天IOD值分别为18285.34±1168.74、17704.03±888.01、17425.58±648.09，A组均高于C组并且差异有统计学意义(P＜0.05)。C组肺组织7、14、28天均可见少量NF-κB在肺泡上皮细胞及支气管上皮细胞中表达，以胞浆为主，B组肺组织中NF-κB表达强度介于两者之间，7、14、28天IOD值分别为79452.24±2566.52、47241.56±2105.12、26183.67±1616.49，较A组降低，差异有统计学意义(P＜0.05)，较C组表达强度高，差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　结论:咯利普兰可能通过抑制NF-κB的活化，减轻佐剂关节炎大鼠肺损伤。

目录

声明

摘要

前言

材料和方法

1 实验材料

2 实验方法

3 观察指标及方法

结果

1 肉眼观察

2 光镜观察

3 肺组织NF-κB出免疫组化结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 类风湿肺疾病与核因子κB的关系

致谢

个人简历