一氧化氮在休克肠淋巴液致血管低反应性中的作用

摘要

背景:前期研究显示，创伤、失血性休克引起血管对血管活性物质，如去多甲肾上素（norepinephrine，NE）、肾上腺素、多巴胺等的反应性下降，是患者死亡的重要原因之一。研究表明，一氧化氮(nitric oxide，NO)参与了失血性休克后血管低反应性的发生;失血性休克肠淋巴液回流是导致血管低反应性的重要因素，结扎肠系膜淋巴管或肠淋巴液引流均可提高失血性休克大鼠的血管反应性与钙敏感性;NO是否与休克肠淋巴液介导血管低反应性的作用有关，值得研究。
　　目的:在建立失血性休克大鼠模型的基础上，观察肠淋巴液引流对失血性休克大鼠肠系膜上动脉(superior mesenteric artery，SMA)血管组织NO及其下游分子环磷酸鸟苷(cyclic guanosine monophosphate，cGMP)、环磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate，cAMP）含量以及磷酸化的蛋白激酶A(phosphorylation protein kinase A，p-PKA)、p-PKG活性的影响;进一步采用离体血管张力测定技术，应用NO供体L-精氨酸（L-arginine，L-Arg）与一氧化氮合酶抑制剂L-硝基-精氨酸甲酯(NG-nitro-L-arginine methyl ester，L-NAME)，探讨NO在休克肠淋巴液介导血管低反应性中的作用，以肠淋巴途径为切入点，为休克血管低反应性的临床干预提供实验依据与理论参考。
　　方法:18只Wistar雄性大鼠随机均分为假手术组(Sham)、休克组(Shock)、休克肠淋巴液引流组(Shock+drainage);大鼠在戊巴比妥钠全身麻醉后，行股部无菌手术，右股静脉注射肝素钠全身抗凝，右股动脉插管连接生物信号采集系统监测平均动脉血压(MAP);左侧股动脉插管后连接注射器固定于抽注机上备放血用。待所有手术完成、稳定30 min后，休克组与引流组大鼠经左侧股动脉匀速放血，10 min内将MAP降至40 mmHg，复制失血性休克模型。Shock+drainage组大鼠行肠系膜淋巴管插管，分别于低血压60 min起引流休克肠淋巴液至休克3h。假手术组大鼠进行相同的手术操作，但不放血。在休克低血压3h或相应时间点，留取SMA，用于检测NO及cAMP、cGMP含量以及p-PKA、p-PKG活性。
　　另18只大鼠按上述分组与实验方法，进行相应的手术以及模型制备，在相应时间点，分离2级肠系膜动脉，应用肌动描记器(620M)观察微血管对梯度NE收缩张力的反应性变化;同时，应用微血管压力-直径测定系统(110P)观察微血管对梯度NE收缩幅度的反应性变化。另外，shock组大鼠的血管环分别与NOS抑制剂L-NAME孵育、shock+drainage组大鼠的血管环与NO供体L-Arg孵育后，进行血管反应性测定。
　　结果:Shock组SMA血管组织NO、cAMP、cGMP、p-PKG的含量显著高于、p-PKA显著低于sham组;shock+drainage组SMA血管组织p-PKA含量显著高于、NO、cAMP、cGMP、p-PKG含量显著低于shock组，且这些指标与sham组无显著差异。
　　Shock组血管环在NE浓度为3×10-6 mol/L、1×10-5 mol/L、3×10-5 mol/L以及shock+drainage组血管环在NE浓度为3×10-6 mol/L时收缩张力的反应性显著低于sham组，且shock+drainage组大鼠的血管环在NE浓度为1×10-5mol/L、3×10-5 mol/L时收缩张力的反应性显著高于shock组;L-NAME提高了shock组大鼠血管环在NE浓度为1×10-5 mol/L、3×10-5 mol/L时收缩张力的反应性，L-Arg降低了shock+drainage组大鼠的血管环在NE浓度为1×10-5mol/L、3×10-5 mol/L时收缩张力的反应性。同时，shock组血管环对梯度NE的Emax显著低于sham组，shock+drainage组血管环对梯度NE的Emax显著高于shock组、PD2显著低于shock组;L-NAME显著提高了shock组Emax。
　　Shock组血管环收缩幅度对NE浓度为1×10-7 mol/L、3×10-7 mol/L、1×10-6 mol/L、3×10-6 mol/L、3×10-5 mol/L以及shock+drainage组血管环收缩幅度对NE浓度为1×10-7 mol/L、3×10-7 mol/L、1×10-6 mol/L时的反应性显著低于sham组;shock+drainage组大鼠血管环的收缩幅度对NE浓度为1×10-7 mol/L、3×10-7 mol/L时的反应性显著高于shock组。同时可见，L-NAME提高了shock组大鼠血管环在NE浓度为3×10-7 mol/L时收缩幅度的反应性，L-Arg降低了shock+drainage组大鼠血管环在NE浓度为1×10-7mol/L、3×10-7 mol/L、1×10-6 mol/L时收缩幅度的反应性。
　　结论:NO参与了休克肠淋巴液介导的血管低反应性。研究结果为以休克肠淋巴液、NO为靶点，干预休克血管低反应性提出了新思路。

目录

声明

摘要

前言

材料与方法

1 主要仪器与实验设备

2 主要药品及试剂

3 主要溶液配制

4 实验动物与分组

5 失血性休克模型复制及肠淋巴液引流

6 肠系膜上动脉血管组织留取与指标检测

7 离体微血管环分离

8 微血管反应性测定

9 统计学分析

结果

1 肠淋巴液引流对失血性休克大鼠血管组织NO含量的影响

2 肠淋巴液引流对失血性休克大鼠血管组织cAMP、cGMP含量的影响

3 肠淋巴液引流对失血性休克大鼠血管组织p-PKA、p-PKG活性的影响

4 肠淋巴液引流对失血性休克大鼠微血管对NE收缩张力反应性的影响

5 肠淋巴液引流对失血性休克大鼠微血管对NE收缩幅度反应性的影响

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 一氧化氮在休克血管低反应性发生机制中的某些研究进展

致谢

个人简历