姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素对人肝癌细胞HepG2中Survivin、Livin蛋白表达的影响

摘要

目的:肝细胞癌(Hepatocellular Carcinoma，HCC)是我国及全世界常见的消化系统恶性肿瘤，而中国是全世界拥有最多新发肝癌的国家，占全球新发病例的一半以上。国内有文献统计，目前肝癌的死亡率居我国大陆地区所有肿瘤死亡率的第2位，且近年来呈明显上升趋势。由于肝癌早期症状不典型，且病情进展迅速，一般发现时多数患者已处于疾病的中、晚期，失去根治性手术切除的机会。肝癌恶性程度较高，术后五年生存率仅15％-40％，且有60％-80％左右的患者在两年内复发。
　　Survivin蛋白及其mRNA高表达于人类大多数肿瘤细胞中，Survivin具有抗细胞凋亡、调节细胞有丝分裂、促进细胞增殖及参与血管的形成等作用。Survivin在肝癌组织和几乎所有的肝癌细胞株中高水平表达，而在癌旁组织及肝硬化组织中未发现。而且Survivin的高表达与肝细胞癌门静脉癌栓的发生、术后肿瘤复发率密切相关。近年研究发现，抑制Survivin蛋白及其mRNA的表达，能够明显抑制肿瘤细胞的生长和增殖，提高肿瘤的治疗效果。Livin蛋白在成人大多数正常组织中低表达或不表达，而在多数恶性肿瘤组织中高表达，同时该蛋白的高表达与肿瘤的分化程度、侵袭、转移过程等密切相关。通过肝细胞癌组织与癌旁组织和正常肝组织的比较研究，Livin蛋白在肝癌组织中表达率显著高于非肿瘤组织。所以Livin和Survivin蛋白的高表达对肝癌的发生、血管浸润、转移、复发及预后等具有重要的影响作用。
　　姜黄素(Curcumin，CUR)、去甲氧基姜黄素(Demethoxycurcumin，DMC)、双去甲氧基姜黄素(Bisdemethoxycurcumin，BDMC)是从姜科植物姜黄的根茎中提取的有色色素，其作为传统中药成分使用在我国具有悠久的历史。姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素具有抗氧化活性、抗炎、抗动脉粥样硬化、抗肝纤维化、抗肿瘤等药理作用，由于其良好的抗肿瘤作用，西方医学对姜黄素类物质的关注和研究越来越多。
　　近年研究发现，姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素能够抑制乳腺癌、胃癌、肠癌、肝癌、胰腺癌等肿瘤细胞的增殖，促进肿瘤细胞的凋亡，可能与下调Survivin蛋白及其mRNA的表达有关，但其机制还有待进一步研究。而关于姜黄素及其衍生物对肝细胞癌中Survivin、Livin的调节作用少见报道。本实验通过研究姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素对肝癌细胞HepG2中Livin、Survivin蛋白表达的影响，初步探讨姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素促进肝癌细胞HepG2凋亡的可能作用机制。
　　方法:本实验采用体外常规培养人肝癌细胞株HepG2的方法，用相同浓度（20μmol/L）的姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素作用于HepG2细胞24h后，流式细胞术(FCM)检测细胞的凋亡变化情况;用姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素三种药物分别以不同浓度（20、40μmol/L）作用于HepG2细胞24h后，采用Western-Blot方法检测肝细胞癌HepG2中Livin、Survivin蛋白表达的变化。
　　结果:1.FCM检测结果显示:经姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素处理的HepG2细胞，细胞凋亡率明显增加(P＜0.05)，双去甲氧基姜黄素的作用效果强于姜黄素和去甲氧基姜黄素(P＜0.05)，姜黄素和去甲氧基姜黄素之间比较无显著差异(P＞0.05)。
　　2.Western-Blot方法检测结果显示:不同浓度（20、40μmol/L）的姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素作用于人肝细胞癌HepG2细胞后， Livin、Survivin蛋白的表达下调(P＜0.05)，且随着浓度的增加Livin、Survivin蛋白表达水平逐渐下降(P＜0.05)。
　　3.分别比较相同浓度（20umol/L和40umol/L）的姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素三者之间对肝细胞癌HepG2细胞中Livin、Survivin蛋白表达影响的强弱，其结果均为双去甲氧基姜黄素＞去甲氧基姜黄素＞姜黄素(P＜0.05)。
　　结论:姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素均可明显诱导人肝癌HepG2细胞的凋亡。姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素均可下调人肝细胞癌HepG2细胞中Livin、Survivin蛋白的表达，其作用强度依次为双去甲氧基姜黄素＞去甲氧基姜黄素＞姜黄素。

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摘要

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材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 凋亡抑制蛋白抗凋亡机制及与肝细胞癌关系的研究进展

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