自然条件下吗啡对大头金蝇幼虫的影响

摘要

目的:研究自然条件下大头金蝇（Chrysomya megacephala）在盐酸吗啡(morphine)作用下的生长发育情况，探索实验指标随时间的规律性变化，积累石家庄地区尸源性蝇类的法医昆虫毒理学(forensic toxicologicentomology)资料，从而为死后间隔时间(Postmortem interval, PMI)的推断提供参考依据。
　　方法:在河北医科大学校园内(N38°02′，E114°31′)以瘦猪肉诱捕大头金蝇，带回实验室置于恒温光照培养箱内连续饲养，以第三代作为母代开始实验。本实验共使用家兔4只，随机分为对照组和3个实验组。对照组家兔经耳缘静脉注射生理盐水1ml/Kg，实验组家兔经耳缘静脉依次注射0.5倍、1.0倍、2.0倍致死量的吗啡，给药30min后将4只家兔处死，处死方法均为重击其枕部迅速致死。取家兔的肌肉组织分别保存，对照组标记为M0，实验组依照给药浓度从小到大依次标定为M1、M2、M3。在28℃恒温条件下用新鲜瘦猪肉诱成蝇产卵，产卵时间记为零时，将卵块移至家兔的肌肉组织上饲养。将培养箱放置在外界自然环境中，选在干燥通风的树荫处进行实验。幼虫孵出12个小时后，每隔12小时留取标本一次，每组每次留取10头幼虫，直到半数化蛹;在幼虫开始化蛹时留取蝇蛹标本，直到半数羽化。将留取的幼虫或者蝇蛹用80℃热水烫死，然后放入浓度为70％的甘油酒精中保存。
　　1、体长体重以及蛹长蛹重的测量
　　从70％的甘油酒精保存液中取出幼虫标本，吸干表面液体，测量体长、体重及蛹长、蛹重并记录。
　　2、幼虫形态学观察及测定
　　从保存液中取出幼虫标本，吸干表面液体，放于培养皿上，用大头针在幼虫腹部一侧扎几个小孔，放入10％的KOH溶液中消化内部组织成分，24h之后将幼虫从KOH溶液中取出，放于培养皿上用镊子轻压虫体，将其体内组织排出。幼虫用清水清洗数遍，在体式显微镜下分离出幼虫的头节至其后2个胸节部分（供幼虫前气门、头咽骨标本制作）以及第8腹节之后的部分（供后气门标本制作）备用。
　　将已分离的幼虫头节至其后2个胸节部分以及第8腹节之后的部分再用清水冲洗两遍，用滤纸吸干多余水分。然后在体视显微镜下将头咽骨展开平铺，依次放入30％、40％、50％、60％、70％的酒精中逐级脱水，每级15min，再依次在80％、90％、95％、100％的酒精、100％酒精与二甲苯的混合液（比例1∶1）逐级脱水，每级30min，更换脱水液时要求用滤纸将前次剩余的液体吸净，最后放入二甲苯中透明，在载玻片上滴加加拿大树胶，解剖镜下将标本整姿，用盖玻片封片，置于阴凉处风干。光学显微镜下观察、拍照。利用计算机图像分析系统对前气门和后气门的平均面积、平均光密度以及头咽骨的面积、骨化面积和平均光密度等多项指标进行测定。
　　各组的各项形态学指标均采用均数±标准差表示，各组最大值或最小值间比较应用单因素方差分析(one way ANOVA)，分析结果由Origin75软件处理得出，以P＜0.05为显著性差异有统计学意义，应用Adobe Illustrato程序作图。
　　结果:
　　1、随着盐酸吗啡浓度的增高，大头金蝇幼虫体长体重也出现增大。药物浓度越高，平均体长、平均体重越大;3龄期后体长及体重不再增加，即进入平台期;当进入离食期（指幼虫不再取食，四处爬动，寻找化蛹部位）后体长及体重开始逐渐减轻。平均蛹长、平均蛹重也随药物浓度的增大而略有增大，但是变化不大。
　　2、自然条件下，M1、M2、M3组幼虫的前气门总面积及其色素管部平均光密度值均随时间呈持续性增长，直至3龄末期后各指标趋于平稳，而M0组则在整个幼虫发育历期中始终保持上升趋势。
　　3、四组幼虫的后气门平均面积始终保持增长趋势，而其平均光密度值则在达到3龄期后进入平缓期。
　　4、头咽骨形态学特征
　　4.1同一药物浓度条件下，大头金蝇幼虫头咽骨颜色随时间的不断延长而变化，其颜色由浅棕黄色逐渐加深为黑褐色;骨化程度不断加强并伴有骨化面积的逐渐增大。
　　4.2自然条件下，大头金蝇幼虫的头咽骨总面积、骨化面积和平均光密度变化趋势基本一致，均随时间而不断增大，待其进入三龄期后，各指标迅速达到最大值，随即进入平台期并维持到化蛹，即可作为PMI的推测指标。
　　4.3盐酸吗啡增大了头咽骨总面积、头咽骨骨化面积的最大值，缩短了达到最大值的时间，加速了幼虫的发育速度。
　　5、本实验所用大头金蝇在自然条件下饲养，室外大气平均温度为22℃-23℃，可于12天完成生活史，其中，从产卵开始计时至半数幼虫化蛹历时4.5天，从化蛹开始至半数羽化历时7.5天。
　　结论:
　　1、自然环境下，吗啡使大头金蝇幼虫最大体长、体重增大;并未改变体长达到最大值的时间，体重达到最大值时间缩短。
　　2、蛹长、蛹重随时间变化不大，在恒定范围内波动，蛹重在羽化成蝇过程中略有减轻。药物浓度越高，蛹长、蛹重越大。
　　3、前气门的面积及色素管部的平均光密度在幼虫发育过程中呈现增高趋势;后气门面积及平均光密度也是呈增高趋势，且浓度越高，数值越大，达到最大值所需时间也越短。
　　4、同一药物浓度条件下，幼虫头咽骨颜色从一龄期的浅棕黄色逐渐加深至三龄期黑褐色，同时，几丁质化程度逐渐加强，骨化面积逐渐增大。在三龄期开始出现点状的附口骨。
　　5、幼虫头咽骨的面积、平均光密度和骨化面积均随时间而逐渐增加，3龄后各指标逐渐趋于平稳;吗啡增大了头咽骨面积、骨化面积的最大值，缩短了达到最大值的时间，加速了幼虫的发育速度。
　　6、在自然条件下饲养的大头金蝇发育历期要短于室内恒温条件下饲养，尤其是自卵至幼虫的发育时间出现明显缩短。

目录

声明

摘要

前言

材料与方法

1 材料

2 方法

3 标本的观察、测量与形态特征的提取

4 任意时段平均温度的获得

5 统计学分析

结果

1 不同浓度下幼虫体长、体重及蛹长、蛹重的测量结果

2 不同龄期幼虫的形态观察

3 不同浓度下幼虫前气门形态指征的变化

4 不同浓度下幼虫后气门形态指征的变化

5 不同浓度下幼虫头咽骨形态指征的变化

6 发育历期的变化

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 大头金蝇各个生活史阶段在法医昆虫学中的意义

致谢

个人简历