阿霉素氧化应激反应介导的心脏毒性作用及其机制研究

摘要

目的:阐明阿霉素(Doxorubicin，DOX)的心脏毒性机制，为寻找有效防治DOX心脏毒性的药物提供重要的理论和实验依据。
　　方法:采用6～8周龄雄性健康SD大鼠作为实验模型，共24只，随机分为四组，每组6只:给药5次组(DOX5)、给药10次组(DOX10)、5次生理盐水对照组(NS5)、10次生理盐水对照组(NS10)。 DOX10组动物给予DOX(2.0mg/kg， i.p.)，NS10组动物给予等体积的生理盐水(Normal Saline，NS)，每周两次给药，共给药10次。5次组(DOX5)给予五次DOX5次后停止给药，生理盐水对照组(NS5)给予NS后停止给药。每次给药结束后，需经过14天的清除期，以颈椎脱臼的方法处死大鼠，清理大鼠迅速剖胸摘取心脏。以眼科剪剪取小鼠心肌，获取心肌组织，检测过氧化氢酶(CAT)活性，检测超氧化物歧化酶(SOD)活性，检测脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量，以此三项标准观察心脏损害程度。Westem blot法检测心肌蛋白凋亡相关信号因子Caspase-3表达，Bcl-2，Bax的蛋白表达，计算Bcl-2/Bax了解细胞凋亡情况。
　　结果:
　　1、DOX实验组均较对照组出现部分区域心肌纤维横纹不齐或消失，核偏移甚至裂解消失，肌纤维水肿，间隙增宽，排列紊乱，有炎性因子渗出，且DOX10组较DOX5组表现更为明显。
　　2、过氧化氢酶(CAT)检测
　　各组过氧化氢酶活性分别为:NS5组（37.27±1.39）U/mg蛋白，DOX5组（29.00±1.14）U/mg蛋白，NS10组（36.31±1.05）U/mg蛋白，DOX10组（24.41±1.13）U/mg蛋白。
　　结果显示，DOX组CAT含量明显低于NS组，差别有统计学意义(P＜0.05)。DOX10实验组CAT含量低于DOX5实验组，差别有统计学意义(P＜0.05)。
　　3、超氧化物歧化酶(SOD)检测
　　各组超氧化物歧化酶(SOD)检测结果分别为:NS5组（28.50±0.54）U/mg蛋白，DOX5组（23.40±0.59）U/mg蛋白，NS10组（27.80±0.25）U/mg蛋白，DOX10组（19.20±0.47）U/mg蛋白。
　　DOX组SOD含量低于NS组，差别有统计学意义（P＜0.05）。DOX10实验组SOD含量低于DOX5实验组，差别有统计学意义（P＜0.05）。
　　4、丙二醛(MDA)检测结果
　　各组丙二醛(MDA)检测结果分别为:NS5组（2.86±0.21）nmol/mg蛋白，DOX5组（6.93±0.39）nmol/mg蛋白，NS10组（3.04±0.31）nmol/mg蛋白，DOX10组（12.00±0.14）nmol/mg蛋白。
　　DOX组MDA含量高于NS组，差别有统计学意义（P＜0.05）。DOX10实验组MDA含量高于DOX5实验组，差别有统计学意义（P＜0.05）。
　　5、Western blot测蛋白凋亡相关信号因子Caspase-3，bcl-2，bax的蛋白表达
　　结果
　　5.1 Caspase-3表达检测结果
　　各组Caspase-3表达检测结果分别为:NS5组14.34±1.59，DOX5组24.21±1.30，NS10组13.39±3.13，DOX10组34.18±1.14。
　　DOX组Caspase-3表达高于NS组，差别有统计学意义(P＜0.05)。DOX10实验组Caspase-3表达高于DOX5实验组，差别有统计学意义(P＜0.05)。
　　5.2 Bcl/Bax比值
　　各组Bcl-2表达检测结果分别为:NS5组24.34±2.80，DOX5组17.42±1.19，NS10组26.46±1.34，DOX10组15.78±2.48。
　　各组Bax表达检测结果分别为:NS5组15.38±1.15，DOX5组24.04±1.62，NS10组14.94±2.47，DOX10组28.97±1.73。
　　各组Bcl-2/Bax比值结果分别为:NS5组1.58±2.43，DOX5组0.72±0.73，NS10组1.77±0.54，DOX1O组0.54±1.43。
　　DOX5实验组Bcl-2/Bax比值低于NS5对照组，差别有统计学意义(P＜0.05)。DOX10实验组Bcl-2/Bax比值低于NS10对照组，差别有统计学意义(P＜0.05)。 DOX10实验组Bcl-2/Bax比值低于DOX5实验组，差别有统计学意义(P＜0.05)。
　　结论:
　　1、DOX给药后，CAT和SOD含量明显降低，说明体内抗氧化系统遭到破坏;DOX给药后，MDA含量显著增加，说明DOX给机体造成严重的氧化损伤。随着给药次数增加，累积剂量增加，氧化损伤加重。
　　2、与对照组相比，DOX给药后，促凋亡因子Caspase-3表达增加，Bax表达增加，而抗凋亡因子Bcl-2表达降低，Bcl-2/Bax比值也显著下降，表明DOX能引起心肌凋亡，氧化应激反应介导的DOX心脏毒性作用可能与诱导心肌细胞凋亡有关。

目录

声明

摘要

前言

材料与方法

1 材料

2 实验方法

3 统计学处理

结果

1 心肌组织的形态学变化

2 过氧化氢酶(CAT)检测

3 超氧化物歧化酶(SOD)检测结果

4 丙二醛(MDA)检测结果

5 Western blot测蛋白凋亡相关信号因子Caspase-3，bcl-2，bax的蛋白表达结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 阿霉素的心脏毒性

致谢

个人简历