灯盏花素包合物脂质体的制备及其特性考察

摘要

目的:灯盏花素(breviscap ine)是菊科植物短葶飞蓬(Erigeron breviscapus)的全草，其中主要成分是灯盏花乙素(scu tellarin)，另含少量灯盏花甲素(apigenin)。灯盏花素具有增加心脑血流量、改善心脑微循环等作用。目前临床主要用于治疗脑梗塞、冠心病、心绞痛等心脑血管疾病。但是灯盏花素水溶性差，口服生物利用度低，静脉注射消除半衰期短都限制了其临床应用。
　　环糊精包合物脂质体(Drug in inclusion complex in liposome，DCL)是将环糊精包合物和脂质体结合研究的产物。环糊精具有筒状结构，外侧是亲水性基团，内侧为疏水性基团，疏水性药物可以通过氢键、范德华力等作用力与环糊精内侧的疏水性基团结合，形成环糊精包合物，从而增加疏水性药物的溶解度，但是这种结合力并不稳定，使得形成的包合物易分解。脂质体是由磷脂和胆固醇组成的类似细胞膜的脂质囊泡，外层是疏水性脂质基团，中间是亲水性内核，亲水性药物被包封在内核中，而疏水性药物被包封在脂质层中。脂质体可以保护药物不被血浆快速清除代谢，从而延长药物在体内的循环时间，可以很好的解决包合物易分解的问题。因此，本课题拟以灯盏花素的主要成分灯盏花乙素为指标，考察其溶解度，制备灯盏花素包合物脂质体，以延长其在体内的循环时间。
　　方法:
　　建立高效液相色谱(HPCL)法测定灯盏花素中灯盏花乙素的浓度，以灯盏花素中的灯盏花乙素为指标，研究灯盏花素在不同溶剂中的平衡溶解度。以包合物对灯盏花素的包封率为指标，考察饱和水溶液法和超声法制备灯盏花素包合物的工艺，单因素考察制备包合物过程中对包封率影响较大的因素，利用正交实验筛选处方。采用超速离心法测定包合物脂质体中灯盏花素的包封率，并以此为指标，单因素考察对包封率影响较大的因素，在此基础上，引入总评归一值，利用星点设计-效应面优化法筛选制备灯盏花素包合物脂质体的最优处方。
　　以灯盏花素中灯盏花乙素的浓度为指标，考察灯盏花素在不同溶出介质中的溶解度，采用溶出仪法分别考察灯盏花素原料药粉末，灯盏花素包合物和灯盏花素包合物脂质体的体外释药行为，绘制体外释放曲线，进行模型拟合，探讨体外释药机理。
　　将10只大鼠随机分为灯盏花素原料药溶液对照组和灯盏花素DCL给药组，考察单剂量静脉注射给药后的药动学行为。建立大鼠血浆中灯盏花乙素浓度测定的高效液相色谱法，大鼠给药后按安排的时间点取血，测定药物浓度后绘制药时曲线，利用PK-Solver软件进行房室模型拟合，计算药动学参数，初步探讨其在大鼠体内药动学特征。
　　将制备的灯盏花素包合物脂质体放置于不同的温度及光照条件下，测定其包封率并观察外观，对其稳定性进行初步考察。
　　结果:
　　建立了测定灯盏花素中灯盏花乙素浓度的高效液相色谱法，以灯盏花乙素浓度为指标，测定了灯盏花素在不同溶剂中的溶解度，并绘制了β-环糊精对灯盏花素的增溶曲线。采用饱和水溶液法制备了灯盏花素包合物，单因素考察了制备包合物过程中对包封率影响较大的因素，利用正交试验设计确定最优处方为主客分子比为1∶2，包合时间为2h，包合温度为60℃。采用薄膜分散法制备了灯盏花素包合物脂质体，并考察了超速离心法和超滤法测定包合物脂质体的包封率。单因素考察了对包封率影响较大的因素，分别为磷脂/药物（m/m，X1）和磷脂/胆固醇（m/m，X2），经过星点设计-效应面优化法优化了处方，最优处方为蜀=64.82，X2=6.25，按最优处方制备三批包合物脂质体，OD值为0.878±0.03。
　　以灯盏花乙素的浓度为指标，采用溶出仪法，考察了灯盏花素在不同溶出介质中的溶解度及灯盏花素溶液、灯盏花素包合物及灯盏花素包合物脂质体的体外释放行为。结果显示灯盏花素包合物脂质体具有明显的缓释作用。
　　体内房室模型拟合结果显示，灯盏花素包合物脂质体符合两室模型，药时曲线下面积(AUC)为1229.11mm·μg·mL-1，是灯盏花素溶液的21.76倍，消除半衰期为t1/2β，约为灯盏花素溶液的2倍，表明灯盏花素包合物脂质体具有明显的缓释作用。
　　稳定性实验结果显示，光照和温度对灯盏花素包合物脂质体的稳定性均有影响，因此制剂应在4℃下避光保存。
　　结论:
　　薄膜分散法制备了灯盏花素包合物脂质体，其包封率高，粒径分散度小，体外释放和静脉注射后均显示出明显的缓释作用，稳定性实验结果表明制剂应在4℃下避光保存。

目录

声明

摘要

英文缩写

引言

第一部分 灯盏花素处方前研究

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

第二部分 灯盏花素包合物的制备及包封率测定

前言

材料和方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

第三部分 灯盏花素包合物脂质体的制备及包封率测定

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

第四部分 灯盏花素包合物脂质体的体外释放度及体内药代动力学的研究

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

第五部分 灯盏花素包合物脂质体稳定性初步考察

前言

材料与方法

结果

附表

讨论

小结

参考文献

结论

综述 环糊精包合物脂质体的研究进展

致谢

个人简历