基于反相高效液相色谱法的降脂类中药复方制剂的质量控制研究及降脂宁颗粒指纹图谱的研究

摘要

高脂血症是中老年人常见的疾病之一，也是备受关注和严重影响中老年人生活质量的疾病.近年来，随着人口老龄化的逐年上升和生活水平的提高，营养的改善及平均寿命的延长，高脂血症的平均发病年龄有逐年下降的趋势，其并发症（如冠心病、动脉粥样硬化、高血压等）发病率日益升高，高脂血症已成为人们严峻的挑战。目前在临床上经常使用的降脂类西药可分为他汀类、贝特类、烟酸类、胆酸螯合剂和胆固醇吸收抑制剂。其中他汀类药物是目前治疗高胆固醇血症的主要药物。但该类药物最常见的不良反应主要是轻度胃肠反应、头痛。与其他降脂药物合用时可能出现肌肉毒性，贝特类等其他药物也有胃肠反应、恶心、腹泻，肠梗阻或头痛甚至肝损害等副反应。而降脂类中药复方制剂在长期临床保健和治疗的实践中具有重要综合作用，它是基于天然中药材及中医理论研究开发出的药品，以复方多味制剂为主要特点，可直接用于疾病防治，安全有效，服用方便，剂量易控，与常规化学药品相比，具有毒副作用较小、安全性较高副作用较少等临床优势。研究还证实，降脂类中成药除了有降低血脂的作用外，还能减缓或终止动脉粥样硬化的过程，经过长期的服用可达到良好的治疗效果。
　　因降脂类中药复方制剂的处方组分多，加之原药材本身成分复杂，故给制订其质量标准及检验方法造成很大困难。随着市场经济的高速发展，药品市场竞争日益激烈，出现了生产、销售及购药使用等环节的相应变化，导致降脂类中药复方制剂的质量不稳。然而药品质量的可控性是药品的基本属性之一，是药品的安全性和有效性的基础。质量标准是监控药品质量的重要手段，是质量可控性的具体体现。故为了使降脂中药复方制剂得到安全有效的广泛的应用，对其指标成分的质量控制就成为我们研究的主要对象。本课题选用降脂灵片、血脂灵片、决明降脂片和降脂宁颗粒的指标成分作为研究对象，采用反相高效液相色谱法对上述降脂类中药复方制剂的指标成分的质量控制进行较为系统的方法学研究，并对降脂宁颗粒进行了指纹图谱的分析。所建立的方法专属性强、精密度和稳定性良好，实验结果准确可靠，可为降脂中药复方制剂的质量控制提供科学、有效的试验方法与依据。
　　第一部分反相高效液相色谱法同时测定降脂灵片中4种蒽醌类成分的含量
　　目的:建立反相高效液相色谱法(reversed phase high performanceliquid chromatography, RP-HPLC)同时测定降脂灵片中橙黄决明素、芦荟大黄素、大黄素和大黄素甲醚的含量。
　　方法:采用Kromasil C18柱(250mm×4.6mm，5μm)，以甲醇-0.1％磷酸为流动相梯度洗脱，流速1.0ml/min，检测波长286nm。
　　结果:在选定的色谱条件下橙黄决明素、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚具有良好的分离度和稳定性，并且分别在16.7-134、11.1-89.1、90.3-722、97.9-797ng范围内线性关系良好。平均回收率分别为98.7％、98.5％、98.5％、102.0％;相对标准偏差(relative standard deviation，RSD)值分别为0.3％、1.0％、0.7％、0.3％。
　　结论:本方法快速，简便，准确，专属性高，可以用于降脂灵片的质量控制。
　　第二部分反相高效液相色谱法同时测定血脂灵片中5种化学成分的含量
　　目的:建立反相高效液相色谱法(reversed phase high performanceliquid chromatography, RP-HPLC)同时测定血脂灵片中二苯乙烯苷、橙黄决明素、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的含量。
　　方法:采用Kromasil C18柱(250 mm×4.6mm，5μm)，以乙腈～0.1％磷酸为流动相梯度洗脱，流速1.0 ml.min-1，检测波长286nm。
　　结果:二苯乙烯苷、橙黄决明素、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚分别在2.04～20.4、0.0836～0.836、0.113～1.13、0.0491～0.491、0.174～1.74μg范围内线性关系良好。平均回收率分别为96.5％、97.2％、97.9％、96.9％、99.2％; RSD值分别为0.57％、1.1％、1.2％、0.71％、0.95％。
　　结论:本方法简便，测定结果准确可靠，可以用于血脂灵片的质量控制。
　　第三部分反相高效液相色谱法同时测定决明降脂片中二苯乙烯苷、大黄素和大黄素甲醚的含量
　　目的:建立反相高效液相色谱法(reversed phase high performanceliquid chromatography, RP-HPLC)同时测定决明降脂片中二苯乙烯苷、大黄素和大黄素甲醚的含量。
　　方法:色谱柱Kcromasil C18柱(250 mm×4.6mm，5μm)，流动相为乙腈-0.1％磷酸，梯度洗脱，流速为1.0ml/min，柱温30℃，检测波长288nm。
　　结果:在选定的色谱条件下，二苯乙烯苷、大黄素和大黄素甲醚完全分离。二苯乙烯苷的回归方程为Y=1.27×102X+825(R=0.9992)，在1.39-9.71μg范围内与峰面积值呈现良好的线性关系，样品平均加样回收率为98.6％，RSD值为1.2％(n=6);大黄素的回归方程为Y=3.39×103X+1.06(R=1.0000)，在0.0677-0.474μg范围内呈现良好的线性关系，加样回收率为98.6％，RSD值为1.1％(n=6);大黄素甲醚的回归方程为Y=2.14×103X-6.66(R=0.9999)，在0.0740-0.518μg范围内与峰面积值呈现良好的线性关系，平均回收率为98.4％，RSD值为1.0％(n=6)。
　　结论:本方法快速、简便，测定结果准确可靠，可用于决明降脂片中二苯乙烯苷、大黄素和大黄素甲醚的含量测定，为其质量标准的制定提供依据。
　　第四部分反相高效液相色谱法测定不同厂家降脂宁颗粒中5种化学成分的含量
　　目的:建立反相高效液相色谱法(reversed phase high performanceliquid chromatography, RP-HPLC)同时测定降脂宁颗粒中二苯乙烯苷、橙黄决明素、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的含量。
　　方法:色谱柱Diamonsil C18柱(250mm×4.6mm，5μm)，流动相为乙腈-0.1％磷酸，梯度洗脱，流速为1.0ml/min，柱温室温，检测波长286nm。
　　结果:在选定的色谱条件下，二苯乙烯苷、橙黄决明素、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚完全分离。二苯乙烯苷的回归方程为Y=23.6X+12.2(R=0.9991)，在0.450-3.15μg范围内与峰面积值呈现良好的线性关系，样品平均加样回收率为96.2％，RSD值为0.57％(n=6);橙黄决明素的回归方程为为Y=1.24×102X-0.0984(R=0.9998)，在0.0500-0.351μg范围内呈现良好的线性关系，加样回收率为96.8％，RSD值为0.85％(n=6);大黄素的回归方程为Y=1.01×102X-0.0674(R=0.9998)，在0.0226-0.158μg范围内呈现良好的线性关系，加样回收率为98.2％，RSD值为0.81％(n=6);大黄酚的回归方程为Y=46.6X-0.0501(R=0.9997)，在0.0246-0.176μg范围内呈现良好的线性关系，加样回收率为98.0％，RSD值为1.1％;大黄素甲醚的回归方程为y=55.4X-0.0191(R=0.9997)，在0.00752-0.0526μg范围内与峰面积值呈现良好的线性关系，平均回收率为97.2％，RSD值为1.2％(n=6)。
　　结论:本方法快速、简便，测定结果准确可靠，可用于降脂宁颗粒中二苯乙烯苷、橙黄决明素、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的含量测定，为其质量标准的制定提供依据。
　　第五部分降脂宁颗粒指纹图谱研究
　　目的:建立降脂宁颗粒（山楂（去核）、制何首乌、决明子、荷叶）的RP-HPLC指纹图谱，为中药复方制剂的生产和产品工艺的质量控制提供参考依据。
　　方法:(1)提取:通过比较不同的提取溶剂、提取时间以及提取方法来保证提取率的最大化(2)色谱条件的优化:通过改变流动相的组成系统、流动相的配比、柱温、检测波长来确定色谱条件，是其符合指纹图谱的要求(3)精密度试验:取同一供试品溶液，重复进样5次，记录峰面积和保留时间。(4)稳定性试验:取同一供试品溶液，分别于0、2、4、8、12h进样，记录峰面积和保留时间。(5)重现性试验:取同一批号降脂宁颗粒粉末5份，平行制备各供试品溶液，分别进样，记录峰面积和保留时间。(6)指纹图谱的建立:分别取10个不同批号的降脂宁颗粒粉末，制备供试品溶液，进行指纹图谱分析和相似度评价。
　　结果:(1)提取:采用75％甲醇超声提取45min为最佳提取方法。(2)色谱条件的优化:采用色谱柱Diamonsil C18柱(250 mm×4.6mm，5μm)，流动相为甲醇(A)-0.1％磷酸(B)，梯度洗脱，洗脱程序为(0～10min，35∶65;10～60min，35∶65～10∶90;60～70min，90∶10)，预平衡10min，流速为1.0ml/min，柱温30℃，检测波长286nm，分析时间70min。参照物为2，3，5，4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷，并且对相关的指纹峰进行峰归属。(3)精密度试验:以2，3，5，4'-四羟基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷（二苯乙烯苷）为S峰，计算各主要色谱峰的相对保留时间及峰面积占总峰面积5％以上峰的峰面积，其RSD分别为0.87％～1.1％和0.84％～2.1％，精密度符合指纹图谱要求。(4)稳定性试验:各主要色谱峰的相对保留时间及峰面积占总峰面积5％以上峰的峰面积，其RSD分别为0.76％～0.93％和0.87％～2.4％，说明该供试品在12h内稳定，符合指纹图谱要求。(5)重现性试验:各主要色谱峰的相对保留时间及峰面积占总峰面积5％以上峰的峰面积其RSD值为0.52％～0.62％和2.5％～2.9％。(6):指纹图谱的简历，得到了10个不同批号的降脂宁颗粒指纹图谱及其25个共有峰，利用相似度评价系统可以分析出不批号的降脂宁颗粒的质量
　　结论:建立降脂宁颗粒的高效液相色谱指纹图谱是可行的，本方法稳定，准确，重复性良好，相似度评价系统能够有效的反映不同批号的降脂宁颗粒的质量，有效控制降脂宁颗粒质量。

目录

声明

摘要

英文缩写

引言

第一部分 反相高效液相色谱法同时测定降脂灵片中4种蒽醌类成分的含量

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

第二部分 反相高效液相色谱法同时测定血脂灵片中5种化学成分的含量

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

第三部分 反相高效液相色谱法同时测定决明降脂片中二苯乙烯苷、大黄素和大黄素甲醚的含量

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

第四部分 反相高效液相色谱法测定不同厂家降脂宁颗粒中5种化学成分的含量

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

第五部分 降脂宁颗粒指纹图谱研究

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

结论

综述 决明子的研究进展

致谢

个人简历