YAP与P-YAP在肝细胞癌中的表达与其临床生物学行为关系的研究

摘要

目的:肝细胞癌(HCC，hepatocellular carcinoma)是肝脏原发肿瘤中最常见的类型，也是我国乃至全世界，最常见的恶性肿瘤疾病之一。通常HCC被发现时患者已进入晚期，常规化疗对其作用不明显，致使生存率较其它癌症显著降低。因此，加强对HCC的发病机制研究，寻找更多关于肝癌基因及抑癌基因的表达并明确其与HCC的关系已成为当前研究的重要方向。
　　Hippo通路在促进细胞凋亡，限制细胞增殖，调控器官分化方面起着重要的作用。YAP(Yes-associated protein)即Yes相关蛋白，作为该通路下游的效应因子，多以磷酸化形式(P-YAP)参与细胞信号转导以调控细胞凋亡与增殖的平衡。在病理状态下，被阻断或失活的Hippo通路对YAP磷酸化作用失效致YAP自身活性增强使细胞增生和凋亡间平衡失调、组织器官过度生长及肿瘤发生。国内外相关研究表明，YAP作为新近发现的癌基因，参与胃癌、结肠癌、肺癌等多种肿瘤的形成和发展。但YAP、P-YAP在肝细胞肝癌组织中的表达情况及意义报道还不多见。本课题以原发肝细胞肝癌患者为研究对象，应用常规病理免疫组化技术、蛋白印迹(Western blot)技术检测YAP，P-YAP在肝细胞癌组织、癌旁肝硬化组织及正常肝组织中的表达情况，从基础与临床相结合角度分析其表达意义，研究了YAP表达与患者年龄、肿瘤大小、AFP水平、病理分级、血管侵犯情况及TNM分期的关系，进而推测YAP在肝细胞肝癌发生发展中的重要功能及意义，为肝癌的发生和诊治提供一定依据。
　　方法:收集唐山市工人医院肝胆外科2012年8月至2014年7月间具有完整临床及病理资料的78例肝细胞肝癌根治性切除术的标本。所取标本一式两份，一份用中性福尔马林固定置备石蜡切块供HE染色和免疫组化使用，一份留取新鲜组织供Western blot备检。HE染色，镜下观察三种组织标本的病理变化;应用免疫组织化学染色SP法检测YAP、P-YAP在三种组织中的表达情况;从冷冻组织中提取蛋白，用Western blot方法检测各组标本中YAP、P-YAP蛋白的表达情况;卡方检验分析YAP与HCC患者年龄、肿瘤大小、病理分级、转移情况及TNM分期的关系;Pearson相关分析对各组中YAP、P-YAP蛋白的表达关系进行相关分析。
　　结果:
　　1 HE染色
　　正常肝组织内肝小叶结构清晰，肝细胞排列紧密有序呈索状，可见中央静脉及多处毛细血管窦;肝硬化组织中肝小叶正常结构被破坏，肝细胞排列紊乱且体积增大，细胞核大且深染，纤维组织增多，可见较多炎性细胞;肝癌组织失去正常肝小叶结构，癌细胞体积增大，异形性明显，大小形态极不一致，胞核明显变大、嗜碱性增强，可见多核及异型核，毛细血管窦扩张。
　　2免疫组织化学法染色结果显示
　　正常肝组织的细胞质中P-YAP表达强阳性，肝硬化组织胞质内弱阳性表达，而肝癌组织中几乎无表达;而与P-YAP相反，YAP在肝癌组织的细胞核及胞浆中呈深棕黄色的强阳性表达，在肝硬化组织胞核及胞浆中棕黄色阳性表达，正常肝组织内无细胞核表达。
　　3 Western blot法检测结果显示
　　正常肝组织内P-YAP蛋白的表达明显高于肝癌组织，差异具有统计学意义;而伴随着正常组织到肝癌的演变，YAP蛋白表达依次升高，在肝癌组织中的表达显著高于肝硬化和正常肝组织，差异具有统计学意义。
　　4癌组织内YAP的表达与AFP水平、病理分级、血管侵犯情况及TNM分期相关，与患者年龄及肿瘤大小无明显相关性。
　　5 P-YAP蛋白表达量随YAP蛋白表达量的增高而下降，两者呈负相关。
　　结论:
　　1 YAP在HCC患者中强阳性表达，且与AFP水平、病理分级、血管侵犯情况及TNM分期相关，与患者年龄及肿瘤大小无明显相关性，提示其可能在肝细胞癌的发生、发展起重要的作用;
　　2肝硬化组织和肝癌组织中P-YAP蛋白表达量随YAP蛋白表达量的增高而下降，两者呈负相关。
　　3 P-YAP在正常肝细胞胞浆内表达，去磷酸化后YAP在HCC患者胞核内表达，可能提示了病理状态下，YAP磷酸化失效，致使去磷酸化的YAP由细胞浆进入细胞核中且转录活性表达增强，发挥自身癌基因作用促进了HCC的发生。

目录

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摘要

英文缩写

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 YAP与恶性肿瘤的的研究现状与进展

致谢

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