化瘀通络中药及其拆方对糖尿病肾病大鼠的干预作用及对肾脏Mas受体的影响

摘要

目的:通过高糖高脂饲料联合链脲佐菌素(Streptozotocin，STZ)复制糖尿病大鼠模型，设立正常对照组（C组）、模型组（M组）、化瘀通络中药组即全方组（Q组）、化瘀中药组（H组）、通络中药组（T组）、厄贝沙坦组（I组）。通过观察大鼠的一般情况、生化指标、肾组织形态学变化及肾组织Mas受体的表达水平，来探讨化瘀通络中药及其拆方可能的作用机制以及Mas受体与糖尿病肾病的关系，为临床治疗糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)提供依据。
　　方法:健康雄性SD大鼠75只，适应性喂养一周后，随机选10只做为正常对照组（C组，n=10），其余为造模组，造模组采用高脂饲料喂养4周，大鼠禁食12小时后，腹腔注射STZ35mg/kg，72小时后测尾静脉随机血糖＞16.7mmol/L为DM大鼠造模成功。死亡及未达标大鼠5只予以剔除，成模大鼠随机分为模型组(M=12)，予相应体积纯水灌胃;厄贝沙坦组(I=12)，予厄贝沙坦混悬液按13.5mg/kg进行干预，全方组(Q=12)，予丹参、川芎、全蝎、水蛭、地龙中药配方颗粒;通络组(T=12)，予全蝎、水蛭、地龙中药配方颗粒;化瘀组(H=12)，予丹参、川芎中药配方颗粒。予相应药物灌胃16周。于第16周末收集大鼠24小时尿液后，动物麻醉状态下腹主动脉取血以检测血液指标，并且留取肾组织行光镜、电镜、免疫组化、western blot、Real-Time PCR，检测Mas受体的表达水平。
　　结果:
　　1实验大鼠的一般情况
　　C组大鼠毛色光泽，肌肉丰满，饮水、饮食量正常，尿量正常。与C组大鼠比较其它大鼠成模后，均出现典型的糖尿病症状，例如多饮、多食、多尿，体重减轻。上述症状以M组最为显著。在注射STZ第7周，开始出现白内障、糖尿病足等糖尿病并发症。但给药组大鼠在治疗过程中症状均有不同程度的缓解。
　　2体重、肾重及肾脏肥大指数
　　结果显示:大鼠肾重组间均无明显差异(P＞0.05);与C组相比，M组及各治疗组大鼠体重明显减轻(P＜0.05);肾脏肥大指数明显升高(P＜0.05)，I组较M组肥大指数明显降低(P＜0.05)，Q、T、H组与M组比较无统计学意义。
　　324小时尿蛋白定量
　　与C组相比，M组及各治疗组24小时尿蛋白总量水平均明显升高(P＜0.05)，但治疗各组明显低于M组;I组与中药各组之间无明显差异(P＞0.05)。
　　4随机血糖
　　与C组相比，M组及各治疗组大鼠随机血糖水平明显升高(P＜0.05)，M组与各治疗组之间血糖水平无明显差异(P＞0.05)。
　　5其它血液指标检测结果
　　5.1血小板
　　I组、 M组与C组相比，血小板计数明显增多(P＜0.05)，C组、Q组、T组、H组之间无明显差异(P＞0.05)。
　　5.2肝功能
　　C组TP、ALB水平均高于其它各组(P＜0.05)，I组、Q组、T组之间TP水平无明显差异(P＞0.05)，且较M组明显升高(P＜0.05)，H组与M组间TP水平无明显差异(P＞0.05);M组明显低于各治疗组ALB水平(P＜0.05)，各治疗组之间无明显差异(P＞0.05)。
　　5.3肾功能
　　与C组相比，M组及各治疗组大鼠CR水平明显升高(P＜0.05)，且造模各组无明显差异(P＞0.05);Q组、T组、I组BUN水平明显高于C组，低于M组(P＜0.05)，H组与M组之间无明显差异(P＞0.05)。
　　5.4血脂
　　与C组相比，M组及各治疗组大鼠TG水平明显升高(P＜0.05)，但Q组、T组、H组明显低于M组(P＜0.05)，I组与M组之间大鼠TG水平无明显差异(P＞0.05);M组及各治疗组大鼠与C组相比TC水平明显升高(P＜0.05)，M组及各治疗组之间大鼠TC水平无明显差异(P＞0.05);与C组相比，M组及各治疗组大鼠LDL水平明显升高(P＜0.05)，但各治疗组大鼠LDL水平明显低于M组(P＜0.05)，Q组较I组LDL水平明显降低(P＜0.05)，Q、T、H组之间无明显差异(P＞0.05)。
　　5.5血凝
　　Q组、T组、H组与C组及M组PT水平均有差异(P＜0.05)，比C组明显降低，但明显高于M组(P＜0.05)，I组与M组之间无明显差异(P＞0.05);M组及各治疗组大鼠与C组相比INR水平明显降低(P＜0.05)，但Q组较M组明显升高(P＜0.05)，其余治疗组之间大鼠INR水平无明显差异(P＞0.05);各组大鼠之间AT、TT水平无明显差异(P＞0.05)。
　　6肾组织形态学观察
　　6.1光镜观察
　　C组大鼠肾组织结构清晰，肾小球无明显肥大或萎缩，毛细血管腔清晰无扩张，基底膜无增厚，系膜无增生;M组大鼠肾小球肥大，基底膜明显增厚，系膜增生，系膜区增宽;与M组相比，I组与Q、T、H组病理改变明显减轻;但H组与其他治疗组比较病理表现略重。
　　6.2电镜观察
　　C组大鼠肾组织结构清晰，肾小球基底膜均匀无增厚，足突分布均匀;系膜区无增宽。M组肾组织结构欠清晰，肾小球基底膜高度均质性增厚;足突融合;系膜增生，系膜基质增多。I组与Q、T、H组结构较清晰，肾小球基底膜节段性增厚，足突部分融合，系膜基质轻度增多。治疗组间比较，H组病理表现略重于其它治疗组。
　　7免疫组织化学法检测肾组织Mas的表达
　　结果显示:Mas在各组中均有表达，主要表达在大鼠肾皮质组织的近端小管，而在肾小球内只有少量表达。与C组相比，造模各组大鼠肾组织中Mas表达明显减少(P＜0.05)，与M组相比，各治疗组Mas的表达明显增多(P＜0.05);治疗各组间比较，H组Mas的表达较少，Q组、T组和I组无差异(P＞0.05)。
　　8 Real-Time PCR检测肾组织Mas mRNA的表达
　　结果显示:与C组相比，造模各组大鼠肾组织中Mas mRNA表达明显减少(P＜0.05)，与M组相比，各治疗组肾皮质Mas mRNA的表达明显增多(P＜0.05);Q组、T组与I组比较无明显差异(P＞0.05)。
　　9 Western-blot方法检测肾皮质Mas的表达
　　结果显示:与C相比，各造模组肾皮质Mas表达水平均明显降低(P＜0.05);与M组相比，治疗组肾皮质Mas表达水平均明显升高(P＜0.05);Q组、T组与I组比较无明显差异(P＞0.05)。
　　结论:
　　1结合肾脏肥大指数、24小时尿蛋白、电镜、光镜等病理变化，证明大鼠成模后16周已出现糖尿病肾病的表现。大鼠尾静脉紫暗、血液高凝状态说明与中医的瘀血阻络证相符。
　　2化瘀通络中药及其拆方与厄贝沙坦均可改善大鼠的一般情况，减少尿蛋白，维持血浆白蛋白含量，降低尿素氮，减轻DN病理改变，具有肾脏保护作用。
　　3化瘀通络中药及其拆方能减少血小板数量，调节脂质代谢，改善血液高凝状态，中药组三组相比，全方与通络组治疗效果显著，优于化瘀中药组。
　　4 DN大鼠肾皮质中Mas表达已明显下降。化瘀通络中药可以提高糖尿病肾病大鼠肾皮质组织中Mas的表达，可能为其发挥肾脏保护作用的原因之一。

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结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 RAS系统新通路ACE2-Ang(1-7)-MAS轴在糖尿病肾病中的研究进展

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