豨莶草提取液的质量控制以及豨莶草提取液对MPP+诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

摘要

豨莶草具有祛风湿、利关节、解毒的功效，常用于风湿痹痛、筋骨无力、腰膝酸软、四肢麻痹、半身不遂、风疹湿疮等症。其化学成分主要含萜和苷类等，其中奇壬醇、豨莶精醇、豨莶苷在免疫调节、抗炎抗风湿、心血管系统、抗病原微生物、抗氧化及抗早孕方面有明显活性。在国内已有学者研究证明，豨莶草提取液能明显保护脑缺血再灌注的大脑皮层神经元损伤模型，其机制与豨莶草抗氧化作用有关。但是关于豨莶草提取液治疗帕金森症的物质基础和具体作用机制在国内外尚未见报道。
　　本课题建立了豨莶草的HPLC指纹图谱共有模式，对不同产地，不同批次的药材进行了相似度比较，并结合定量测定结果对各批药材进行评价。采用正交试验设计，以奇壬醇的提取率为考察指标，考察提取溶媒及溶媒用量、提取时间、提取次数等4个因素对提取结果的影响，筛选了豨莶草的最佳提取工艺。同时，利用帕金森病的细胞模型，探讨了豨莶草提取液对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的PC12细胞损伤是否具有保护作用，并探讨其作用机制。
　　第一部分 豨莶草的高效液相色谱指纹图谱研究
　　目的:建立豨莶草的HPLC指纹图谱，得到对照图谱，与不同产地、不同批次豨莶草药材的指纹图谱相比较，并测定各批药材中奇壬醇、豨莶苷、豨莶精醇的含量，为科学评价与有效控制豨莶草药材质量提供方法。
　　方法:色谱柱为Kromasil WQ C8柱（250mm×4.6mm，5μm），流动相为甲醇-乙腈-0.05mol·L-1 KH2PO4溶液进行梯度洗脱，柱温30℃，检测波长为215nm，流速1 mL·min-1。
　　结果:建立了豨莶草的HPLC指纹图谱共有模式，对不同产地，不同批次的药材进行了相似度比较，并结合定量测定结果对各批药材进行评价。
　　结论:本方法操作简便、快速、准确，为豨莶草药材的鉴别和全面质量控制提供了新的依据。
　　第二部分 正交法试验优选豨莶草的提取工艺
　　目的:筛选豨莶草的最佳提取工艺。
　　方法:采用正交试验设计，以奇壬醇的提取率为考察指标，考察提取溶媒及溶媒用量、提取时间、提取次数等4个因素对提取结果的影响。
　　结果:豨莶草最佳提取条件为加12倍量的80％乙醇，回流提取3次，每次提取40 min。
　　结论:本工艺重现性好，测定方法可行，为大批量豨莶草提取奇壬醇提供了理论依据。
　　第三部分 豨莶草提取液对MPP+诱导的PC12细胞凋亡的保护作用
　　目的:探讨豨莶草提取液对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的PC12细胞损伤是否具有保护作用，并探讨其作用机制。
　　方法:在生长状态良好的PC12细胞中加入终浓度为400μmol·L-1的MPP+，建立帕金森病的离体实验模型，并观察豨莶草提取液对MPP+诱导的PC12细胞损伤的保护作用。倒置显微镜下观察细胞形态，MTT法检测细胞活力，DCFH-DA荧光探针法检测细胞内ROS水平。
　　结果:400μmol·L-1 MPP+作用PC12细胞，能明显抑制细胞生长，诱导细胞凋亡，升高活性氧水平。同时给予不同浓度豨莶草提取液，PC12细胞存活率明显增加，活性氧水平显著降低。
　　结论:豨莶草提取液能有效改善MPP+诱导的PC12细胞的损伤，其作用机制可能与降低活性氧水平有关。

目录

声明

摘要

英文缩写

引言

第一部分 豨莶草的高效液相色谱指纹图谱研究

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

第二部分 正交法试验优选豨莶草的提取工艺

前言

材料与方法

结果

附表

讨论

小结

参考文献

第三部分 豨莶草提取液对MPP+诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

前言

材料与方法

结果

附图

讨论

小结

参考文献

结论

综述 豨莶草药理活性与毒性研究新进展

致谢

个人简历