血管内皮生长因子与IVF患者子宫内膜容受性关系

摘要

目的:
　　体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization embryo transfer, IVF-ET)技术为不孕症患者提供了福音，目前临床工作中，移植相对优质的胚胎，临床妊娠率仍不能达到期望。通过研究拟行IVF-ET患者预备周期种植窗期子宫内膜腺上皮细胞、腔上皮细胞的血管内皮生长因子(vascularendothelial growth factor,VEGF)的表达，比较预备周期种植窗期子宫膜VEGF表达水平在妊娠组和未妊娠组的差异，探讨VEGF与临床妊娠结局之间的关系，进而阐明VEGF能否作为预测临床妊娠结局评估内膜容受性的指标从而指导临床。
　　方法:
　　收集在河北医科大学第四医院生殖医学科首次拟行IVF-ET患者预备周期种植窗期子宫内膜组织27例，应用免疫组织化学SP法检测:将部分子宫内膜组织用4％甲醛固定，石蜡包埋，制备厚度为4μm的连续组织切片，行免疫组化染色:脱蜡、高压抗原修复、封闭、加入一抗(VEGFpolyclonal antibody稀释浓度为1∶100)、二抗工作液、DAB液显色、苏木素复染、脱水干燥后以中性树胶封片。用PBS代替一抗做为阴性对照，显微镜观察结果，拍照并记录。阳性判断标准:每张染色片随机选取5个高倍视野，用PBS代替一抗染色片为阴性对照，以背景清晰、细胞质着色呈棕黄色为阳性，分为4个等级记录:细胞均无任何阳性染色为“-”;25％以下细胞阳性染色为弱阳性(+);25％～50％细胞阳性染色为中等强度阳性(++);50％以上细胞阳性染色强阳性(+++)。应用逆转录聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)检测技术，取子宫内膜组织约50 mg加入Rezol1 ml置匀浆器内充分匀浆，提取总RNA，取出0.5μl，反转录得cDNA，继而进行PCR扩增，同时以扩增片段长度为605bp的GAPDH作为内参照。VEGF PCR循环条件为:95℃10 min，1个循环;95℃45 s，60℃45 s，72℃50s，35个循环;72℃10 min，1个循环。产物经1.5％琼脂糖凝胶电泳30 min后，用VDS图像分析系统进行图像分析和拍照记录。IOD值经内参照校正，将校正值进行统计学分析。根据临床妊娠结局分为两组:妊娠组和未妊娠组。数据采用SPSS11.5统计软件进行处理分析，计量资料以均数±标准差（(x)±s）表示，两组间均数比较采用独立样本t检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。
　　结果:
　　1、临床妊娠组与未妊娠组的平均年龄分别为27.36±3.18岁和28.41±4.15岁，两组在年龄、不孕年限、Gn天数、获卵数及移植胚胎数方面，差异均无统计学意义（P＞0.05）。
　　2、IVF患者预备周期种植窗期VEGF在子宫内膜组织腔上皮细胞和腺上皮细胞中呈阳性表达，但腺上皮细胞表达强于腔上皮细胞，VEGF表达定位于细胞质，腺腔内分泌物也呈现棕黄色。
　　3、IVF患者临床妊娠组预备周期种植窗期子宫内膜组织VEGF表达高于未妊娠组，差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　结论:
　　1、子宫内膜腔上皮细胞和腺上皮细胞表达的VEGF在胚胎种植窗期的强表达提示VEGF在胚胎着床中起着重要作用。
　　2、IVF-ET患者中临床妊娠组预备周期种植窗期子宫内膜组织VEGF的高表达，提示子宫内膜VEGF可能就是影响胚胎着床的原因之一。
　　3、IVF-ET预备周期测定VEGF在子宫内膜的表达可作为预测子宫内膜容受性，进而预测妊娠能否成功的参考指标之一。

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结论

参考文献

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