柚皮素对骨质疏松性骨折大鼠的作用及对OPG/RANKL/RANK系统的影响

摘要

目的:
　　观察柚皮素对去卵巢致骨质疏松性骨折大鼠骨密度、生物力学、影像学、组织学的作用，系统评价柚皮素对大鼠骨质疏松性骨折愈合的作用，并进一步观察柚皮素对骨质疏松性骨折大鼠OPG/RANKL/RANK系统的作用，初步探讨其作用机制。
　　方法:
　　1、动物分组与给药雌性SD大鼠（60只），随机平均分为对照组(Control)、模型组(Model)、柚皮素低剂量组(Nar-L):35 mg/kg、柚皮素中剂量组(Nar-M):70 mg/kg、柚皮素高剂量组(Nar-H):140 mg/kg，按照大鼠体重10 ml/kg体积灌胃给药连续8周。对照组与模型组按照体重给以等体积的0.5％ CMC-Na溶液。
　　2、模型制备大鼠卵巢去除手术:麻醉采用腹腔注射戊巴比妥钠，找到腋中线腰部肋下1 cm左右，用碘酒和酒精依次消毒后，开始大鼠去除卵巢手术。将去卵巢手术后的大鼠常规饲养12周造成骨质疏松症大鼠，将骨质疏松症模型大鼠麻醉，暴露右侧股骨，用钢锯切断股骨，造成横行骨折，以顺行方式置入直径1.5mm克氏针，制备大鼠骨质疏松性骨折模型。
　　3、观察指标与检测方法
　　3.1 骨密度(BMD)检测:大鼠右侧股骨骨密度值采用双能X线骨密度仪测定。
　　3.2 放射学观察:双能X线摄片观察大鼠骨折线及其骨痂生长情况。
　　3.3 血液生化指标检测:麻醉后，腹主动脉取血，离心后，采用自动生化分析仪测定血清钙(Ca)、磷(P)、碱性磷酸酶(ALP)、酸性磷酸酶水平(ACP)。
　　3.4 骨生物力学检测:采用万能材料试验机分别行术侧股骨三点弯曲实验，测量最大弯曲力、抗弯强度、断裂挠度、弹性段终点荷等生物力学参数。
　　3.5 组织学HE染色:取骨折处骨痂组织，固定处理后进行HE染色，显微镜下进行形态学观察。
　　3.6 OPG、RANKL和RANK mRNA的表达:采用RT-PCR检测。
　　3.7 OPG、RANKL和RANK蛋白的表达:采用Werstern-blot检测方法检测。
　　结果:
　　1、各组血生化指标分析与对照组比较，模型组血清中Ca、P水平明显下降(P＜0.01)，ALP水平明显上升(P＜0.01);与模型组比较，柚皮素中、高剂量组Ca水平显著上升(P＜0.01)，柚皮素三个剂量组P水平均显著上升(P＜0.01)，而三个剂量剂组ALP水平均显著下降(P＜0.01)，ACP水平在各组无明显改变。
　　2、各组骨密度分析与对照组比较，模型组骨密度水平明显下降(P＜0.01);与模型组比较，柚皮素中、高剂量组骨密度水平显著上升(P＜0.01)。
　　3、各组骨生物力学指标分析与对照组比较，模型组骨中最大弯曲力、抗弯强度、断裂挠度、弹性段终点荷明显下降(P＜0.01);与模型组比较，柚皮素三个剂量组最大弯曲力均显著上升(P＜0.01)，柚皮素高剂量组抗弯强度显著上升(P＜0.01)，柚皮素中、高剂量组断裂挠度、弹性段终点荷显著上升(P＜0.01)。
　　4、双能X线摄片结果分析 X线片显示与对照组比较，模型组显示有明显的骨折线，周围呈现明显的骨痂生长;与模型组X片比较，柚皮素组骨折端缝隙明显减少，高剂组骨痂体积减小，骨折愈合最为明显。
　　5、HE染色组织学观察光学显微镜观察到，对照组有大量成熟骨小梁形成，骨小梁较粗且排列致密有序，数目较多，排列方向与主应力方向一致;模型组可见软骨性骨痂，少量成熟骨小梁细胞，骨小梁粗细不均且排列紊乱，与主应力方向不一致，互相交错成网状;柚皮素组与模型组比较，病理变化有明显改善，骨小梁较粗，数目增多，排列较有序。
　　6、各组大鼠股骨OPG、RANKL、RANK mRNA表达情况与对照组比较，模型组股骨OPG mRNA表达明显下降(P＜0.01)，RANKL、RANKmRNA表达明显上升（P＜0.01）;与模型组相比，柚皮素组三个剂量组OPG mRNA表达明显上升(P＜0.01)，柚皮素三个剂量组RANKL和RANKmRNA表达明显下降(P＜0.01)。
　　7、各组大鼠股骨OPG、RANKL、RANK蛋白表达的变化与对照组比，模型组股骨OPG蛋白表达明显下降(P＜0.01)，RANKL、RANK蛋白表达明显上升(P＜0.01);与模型组相比，柚皮素组中、高剂量组OPG蛋白表达明显上调(P＜0.01)，柚皮素组高剂量组RANKL蛋白表达明显下降(P＜0.05)，柚皮素组中、高剂量组RANKL蛋白表达明显下调(P＜0.01)。
　　结论:
　　柚皮素对去卵巢大鼠骨质疏松性骨折有促进骨折愈合的作用，与调节OPG/RANKL/RANK系统有关。

目录

声明

摘要

英文缩写

引言

第一部分 柚皮素对去卵巢致骨质疏松性骨折大鼠愈合的作用

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

第二部分 柚皮素对去箩日巢致骨质疏松性骨折大鼠OPG／RANKL／RANK系统的作用

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

结论

综述 骨质疏松性骨折研究进展

致谢

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