PD-1基因多态性与上皮性卵巢癌患者发病风险及临床预后关系的研究

摘要

目的：卵巢癌是致死率最高的妇科恶性肿瘤，最常见的组织学类型为上皮性卵巢癌(Epithelial Ovarian Cancer, EOC)。目前治疗原则是以手术为主，化疗为辅的综合治疗。由于早期EOC无典型临床表现，临床诊断缺乏有效的分子标志物，所以70％卵巢癌确诊时已为晚期。初始治疗中仅有70%卵巢癌患者对铂类化疗药敏感[1]，但治疗后仍有2/3的患者3年内复发，故EOC患者预后很差，5年生存率仅为20%~40%[2]。因此寻找有效EOC筛查的分子标志物和治疗新策略成为现今研究的重点。目前较多证据证明卵巢癌具有免疫原性[3]，卵巢癌的免疫诊断及治疗受到了广泛关注。PD-1(programmed death1)程序性死亡受体1是一种重要的免疫抑制因子，PD-L1是其主要配体，二者结合后抑制T细胞活性，从而抑制免疫反应的发生[4]，介导肿瘤免疫逃逸。有关 PD-1基因与肿瘤发生及预后的关系己经成为肿瘤研究的热点之一。本研究旨在探讨PD-1基因单核苷酸多态性（SNPs）与EOC患者发病风险及临床预后的关系。
　　方法：1)标本采集:收集620例经手术后病理证实的EOC患者和620例健康对照组妇女的外周静脉血5ml，抗凝处理后4℃保存，并记录其相关病史资料。采用蛋白酶 K消化-饱和氯化钠盐析法提取血液标本中的DNA。应用聚合酶链反应-连接酶检测反应（ polymerase chain reaction-ligase detection reaction，PCR-LDR）对所采集的研究对象外周血DNA的PD-1基因 rs36084323(PD-1.1)和rs2227981(PD-1.5)多态位点进行基因型检测。2) PD-1基因SNPs位点与EOC发病关系的研究（病例-对照研究）：620例EOC患者作为病例组，620例健康妇女作为对照组。分析两组之间PD-1.1、PD-1.5位点基因型与等位基因频率分布差异。3) PD-1基因SNPs位点与EOC临床预后关系的研究（队列研究）:620例患者中有258患者具有3年以上随访资料，163患者有5年以上随访资料。随访包括：评价复发的指标为无疾病进展生存时间（Progression-Free Survival， PFS），和总生存时间（Overall Survival，OS）。分析2个SNPs与EOC患者临床预后的关系。4)统计：运用SPSS22.0版软件包（SPSS Company， Chicago，Illinois，USA）进行数据统计分析。基因型频率的预期值与观察值进行Hardy-Weinberg（H-W）平衡分析并采用χ2检验进行比较。基因型频率和等位基因频率在病例组和对照组分布采用行×列表的χ2检验进行比较。运用非条件Logistic回归模型的方法计算出相对风险度比值比（odds ratio，OR）及其95%可信区间（confidence interval，CI）。PD-1.1与PD-1.5单体型（haplotype）频率在病例组和对照组分布采用单体型分析法进行比较。生存分析采用Kaplan-Meier法，各因素水平间比较用Log-rank分析， Cox回归模型进一步分析预后相关因素（患者年龄、临床分期、肿瘤分化程度、病理类型、初次手术后残存灶大小）。以P<0.05作为差异有统计学意义的标准。
　　结果：1 PD-1.1多态的 A/A、A/G、G/G三种基因型频率在卵巢癌组为27.3%，48.6%，24.2%，在对照组为20.8%，52.1%，27.1%，两组相比有统计学差异（P=0.028）。与A/A基因型比较，携带A/G基因型或G/G基因型均显著降低妇女卵巢癌的发病风险（OR=0.71，95%CI=0.54-0.94;OR=0.68，95%CI=0.50-0.94）。等位基因A和G在卵巢癌组及对照组中分布频率分别为51.3%、48.7%和46.9%、53.2%，两组相比有统计学差异（P=0.02），与等位基因A比较，G基因的携带者卵巢癌的发病风险明显降低（OR=0.83，95%CI=0.71-0.97）；2 PD-1.5多态的 C/C、C/T、T/T三种基因型频率在卵巢癌组为56.6%，37.6%，5.8%，在对照组为51.5%，40.3%，8.2%，两组相比无统计学差异（P=0.096）。C/C、C/T+T/T基因型在卵巢癌组所占比例分别为56.6%、43.4%，在对照组所占比例分别为51.5%、48.5%，两组相比统计学差异不明显（P=0.064）。等位基因C和T在卵巢癌组及对照组中分布频率分别为75.4%、24.6%和71.6%、28.4%，两组相比有统计学差异（P=0.033），与等位基因C比较，T基因携带者卵巢癌的发病风险降低（OR=0.82，95%CI=0.69-0.98）；3 PD-1.1与PD-1.5单体型AC、AT、GC、GT频率在病例组分别为51.2%，0.3%，24.2%，24.3%，在对照组为46%，0.9%，25.6%，27.5%，两组相比有统计学差异（P=0.023），与单体型AC比较，携带GT单体型可降低妇女卵巢癌发病风险（OR=0.79，95%CI=0.65-0.96）；4 PD-1.1多态的A/A、A/G、G/G3种基因型的患者3年中位无疾病进展生存时间（progression-free survival,PFS）分别为12、22、13个月，中位总生存时间（overall survival，OS）分别为29、36、36个月，5年中位无疾病进展生存时间（PFS）分别为13、12、12个月，中位总生存时间（OS）分别为38、33、52个月。经Kaplan-Meier单因素分析，基因型频率分布与EOC患者的3年、5年PFS和OS无关。经Cox回归多因素分析显示（用年龄、临床分期、初次手术残余灶大小校正基因型频率分布），PD-1.1（rs36084323）A/A、A/G、G/G基因型频率分布与患者的3年、5年复发率和死亡率无关；5 PD-1.5位点携带 C/C、C/T+T/T两种基因型的患者3年中位无疾病进展生存时间（PFS）分别为15、16个月，中位总生存时间（OS）分别为36、36个月，5年中位无疾病进展生存时间（PFS）分别为12、12个月，中位总生存时间（OS）分别为36、44个月。经 Kaplan-Meier单因素分析，基因型频率分布与EOC患者的3年、5年PFS和OS无关。经Cox回归多因素分析显示（用年龄、临床分期、初次手术残余灶大小校正基因型频率分布），PD-1.5（rs2227981）C/C、C/T+T/T基因型频率分布与患者的3年、5年复发率和死亡率无关。
　　结论：
　　1.PD-1.1（rs36084323）多态位点可能与EOC发病风险相关，G基因携带者可能明显降低EOC的患病风险。
　　2.PD-1.5（rs2227981）多态位点的C等位基因可能与EOC发病相关。
　　3.PD-1.1（rs36084323）与 PD-1.5（rs2227981）单体型可能与 EOC发病风险相关。
　　4.PD-1.1（rs36084323）、PD-1.5（rs2227981）2个多态位点可能与EOC患者临床预后无关。

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前言

材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

3 统计学分析

结果

1 一般特征

2 PD-1.1与EOC发病风险关系

3 PD-1.5与EOC发病风险关系

4 PD-1.1与PD-1.5单体型频率分布与EOC发病风险关系

5 PD-1.1与EOC患者临床预后的关系

6 PD-1.5（rs2227981）与EOC患者临床预后的关系

附图

附表

讨论

1 PD-1基因2个SNPs与EOC发病风险关系

2 PD-1.1与PD-1.5单体型频率分布与EOC发病风险关系

3 PD-1基因2个SNPs与EOC患者临床预后的关系

结论

参考文献

综述: PD-1基因与上皮性卵巢癌关系的研究

致谢

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