Pokemon、MDM2和p53蛋白在食管鳞癌中的表达及临床意义

摘要

目的:中国是世界上食管癌高发病率及死亡率的国家。多年来，食管癌的发病率和死亡率居高不下，严重威胁国民的生命健康。与欧美国家不同，中国居民的食管癌病理组织学类型主要为鳞状细胞癌，占90％以上。目前公认，早期发现、早期诊断和早期治疗即“三早”是食管癌防治的最有效措施，而早期发现和早期诊断是实现早期治疗的关键。目前临床上常用的单一肿瘤标志物对于食管癌的早诊价值有限，更多的研究聚焦于多肿瘤标志物联合检测提高早期诊断率。因此，本研究将食管鳞癌作为研究对象，选取 Pokemon→ARF→MDM2→wtp53（野生型 p53）致癌通路中的Pokemon、MDM2和p53（包括野生型 p53、突变型 p53）蛋白为研究指标，采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶连接(SP)法检测食管鳞癌组织与癌旁正常食管组织中Pokemon、MDM2和p53蛋白的表达情况，分析三者与临床病理特征之间的关系，探讨其临床意义。
　　方法:
　　1、食管鳞癌组织和正常对照组织来源于2010年1月至2014年12月期间，在河北医科大学第一医院行手术治疗的62例食管鳞癌患者，术前均未进行化疗、放疗和其他与抗肿瘤相关的治疗。其中男性39例，女性23例；年龄48岁～75岁，平均年龄63.13±5.67岁。全部研究对象均经我院病理科两位高年资医师独立做出诊断，诊断一致者纳入研究范围。分组情况：食管鳞癌组62例（手术切除的肿瘤组织）；对照组标本选取上述患者的癌旁正常食管黏膜组织35例（距离食管癌组织边缘5厘米以上）。高分化鳞癌10例，中分化鳞癌28例，低分化鳞癌24例。侵及纤维膜36例，未侵及纤维膜26例。有淋巴结转移24例，无淋巴结转移38例。临床TNM分期I+II期42例，III+IV期20例。
　　2、常规组织学处理所有标本均经10%中性福尔马林溶液固定，常规石蜡包埋切片，HE染色供病理学观察。肿瘤组织学分级根据美国联合癌症委员会（AJCC）/国际抗癌联盟（UICC）2009年制订的第七版食管鳞状细胞癌TNM分期系统。
　　3、免疫组织化学检测石蜡包埋组织以厚度4um连续切片，烤箱过夜(60℃~65℃)，常规脱蜡，应用柠檬酸修复液煮沸修复，采用免疫组化法(SP)染色，严格按照免疫组化试剂盒说明书步骤进行， DAB显色、苏木素复染，已知Pokemon蛋白、MDM2蛋白、p53蛋白阳性切片作阳性对照，阴性对照以PBS液代替一抗。
　　4、结果判定采用双盲法显微镜下观察结果。Pokemon蛋白、MDM2蛋白、p53蛋白为细胞核染色。阳性判定以染色强度结合阳性细胞数综合判定。
　　5、统计学方法应用SPSS16.0软件，计数资料组间比较采用?2检验进行统计分析；相关性检测使用Spearman等级相关分析，以P<0.05为差异有统计学意义。
　　结果:
　　1、 Pokemon蛋白组间表达及与临床病理特征间关系
　　1.1、 Pokemon蛋白组间比较情况：Pokemon蛋白在食管鳞癌组中及癌旁正常对照组中的阳性表达率分别为67.74%（42/62）、42.86%（15/35），食管鳞癌组中阳性表达率显著高于癌旁正常对照组，差异有统计学意义（均P<0.05）。
　　1.2、食管鳞癌中Pokemon蛋白的表达与临床病理特征之间的关系：食管鳞癌组中Pokemon蛋白的表达与食管鳞癌分化程度、淋巴结转移、TNM分期明显相关（P<0.05），其阳性表达在低分化鳞癌显著高于高中分化鳞癌，有淋巴结转移患者明显高于无淋巴结转移患者，临床 III+IV期患者明显高于 I+II期患者；与患者性别、年龄及是否侵及纤维膜无明显相关性（P>0.05）。
　　2 MDM2蛋白组间表达及与临床病理特征间关系
　　2.1、 MDM2蛋白组间比较情况：MDM2蛋白在食管鳞癌组中及癌旁正常对照组中的阳性表达率分别为54.84%（34/62）、28.57%（10/35），食管鳞癌组中阳性表达率显著高于癌旁正常对照组，差异有统计学意义（均P<0.05）。
　　2.2、食管鳞癌中MDM2蛋白的表达与临床病理特征之间的关系：食管鳞癌组中MDM2蛋白的表达与食管鳞癌分化程度、淋巴结转移、TNM分期明显相关（P<0.05），其阳性表达在低分化鳞癌显著高于高中分化鳞癌，有淋巴结转移患者明显高于无淋巴结转移患者，临床 III+IV期患者明显高于 I+II期患者；与患者性别、年龄及是否侵及纤维膜无明显相关性（P>0.05）。
　　3、 p53蛋白组间表达及与临床病理特征间关系
　　3.1、 p53蛋白组间比较情况：p53蛋白在食管鳞癌组中及癌旁正常对照组中的阳性表达率分别为72.58%（45/62）、17.14%（6/35），食管鳞癌组中阳性表达率显著高于癌旁正常对照组，差异有统计学意义（均P<0.05）。3.2食管鳞癌中p53蛋白的表达与临床病理特征之间的关系：食管鳞癌组中p53蛋白的表达与食管鳞癌分化程度、是否侵及纤维膜、淋巴结转移、TNM分期明显相关（P<0.05），其阳性表达在低分化鳞癌显著高于高中分化鳞癌，侵及纤维膜者明显高于纤维膜未受侵者，有淋巴结转移患者明显高于无淋巴结转移患者，临床 III+IV期患者明显高于 I+II期患者；与患者性别、年龄无明显相关性（P>0.05）。
　　4、 Pokemon、MDM2和p53蛋白的相关性
　　Spearman等级相关分析显示，食管鳞癌组中Pokemon与MDM2蛋白表达呈正相关(r=0.599, P<0.01)；Pokemon与 p53蛋白表达呈正相关(r=0.501, P<0.01)；MDM2与p53蛋白表达呈正相关(r=0.359, P<0.01)。
　　结论:
　　1、 Pokemon、MDM2、mtp53（突变型 p53）蛋白在食管鳞癌中阳性表达率均显著高于癌旁正常食管黏膜组，提示Pokemon、MDM2、mtp53蛋白在食管鳞癌发生过程中发挥致癌作用，有潜力成为早期诊断食管鳞癌的肿瘤标记物。
　　2、 Pokemon、MDM2蛋白阳性表达率与食管鳞癌分化程度、淋巴结转移、TNM分期相关，mtp53蛋白阳性表达率与食管鳞癌分化程度、肿瘤是否侵及纤维膜、淋巴结转移、TNM分期均相关，提示Pokemon、MDM2、mtp53蛋白对于判断食管鳞癌恶性程度和预后情况存在一定的价值。
　　3、 Pokemon、MDM2、mtp53蛋白表达在食管鳞癌组织中互为正相关，提示三者在食管鳞癌发病过程中之间存在协同致癌作用。

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前言

材料与方法

1 资料

2 仪器与试剂

3 实验方法及步骤

4 统计学处理：

结果

1 食管正常黏膜、食管鳞癌的HE染色结果

2 Pokemon蛋白在食管鳞癌组及正常食管黏膜组中的表达

3 MDM2蛋白在食管鳞癌组及正常食管黏膜组中的表达

4 p53蛋白在食管鳞癌组及正常食管黏膜组中的表达

5 Pokemon、MDM2和p53蛋白在食管鳞癌组中表达的相关性

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述:Pokemon和MDM2基因与消化系统癌症的研究进展

致谢

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