子痫前期患者母血及胎盘组织中HtrA4、Syncytin-1的表达及意义

摘要

目的：子痫前期（Preeclampsia，PE）是妊娠期特有的疾病，严重危害母儿健康。全球发病率为3-8％，且各地区发病率呈逐年上升趋势。子痫前期的发病机制至今尚未完全阐明，研究发现其与细胞凋亡、血管痉挛，凝血系统激活，炎症反应等密切相关，而这些病理变化集中表现为胎盘的异常。多数研究认为，子痫前期的病理变化起始于胎盘“浅着床”和胎盘血管重铸障碍。研究证实多种胎盘来源的蛋白因子的表达异常参与子痫前期胎盘滋养细胞的功能，如可溶性血管内皮生长因子、胎盘生长因子、HtrA家族、合胞素等，但极少数被认为是子痫前期病情严重程度的预测指标。其中，HtrA4又称高温需求蛋白4，是丝氨酸蛋白酶家族成员之一，其分子量为51kDa。高温时作为蛋白酶降解折叠错误的周质蛋白，低温时显示蛋白质分子伴侣功能，研究表明HtrA4参与胎盘发育，被认为是早发型子痫前期可能的预测指标。而Syncytin-1是由人内源性逆转录缺陷病毒(HERV）家族成员HERV-W编码的包膜蛋白，其分子量为33kDa。高度表达于胎盘合体滋养细胞层，介导胎盘滋养细胞的融合分化，对胎盘发育具有重要意义。有研究发现HtrA4通过其PDZ结构域与Syncytin-1的SU亚单位结合，抑制了滋养细胞之间的融合、分化，造成胎盘浅着床，引发子痫前期。本研究从检测母血及胎盘组织中HtrA4和syncytin-1的含量变化及其与临床指标的相关性角度进行研究，探讨其对胎盘滋养细胞融合、分化的影响，进而加深对子痫前期发病机制的了解，并指导临床诊断和治疗。
　　方法：⑴按照《妊娠期高血压疾病诊治指南（2015）》中重度子痫前期的诊断标准选取2014.02至2015.05于河北医科大学第二医院产前检查和住院的重度子痫前期患者74例，发病孕周<34周的早发型子痫前期（Early-onset preeclampsia，E-PE）组39例，>34周的晚发型重度子痫前期（Late onset severe preeclampsia，LS-PE）组35例，同期随机选取33例健康孕妇作为对照组。⑵所有研究对象在终止妊娠前3天内应用彩色多普勒超声检测脐动脉血流动力学参数：收缩期峰值流速与舒张末期血流速度之比（S/D）、搏动指数（PI）及阻力指数（RI）。收集所有研究对象分娩前母血3ml，离心，取上清液，置于-70℃冰箱保存，待测。胎盘娩出后立即取胎盘母面近脐带根部直径3cm范围内的组织，约l x l x lcm大小，生理盐水冲洗后至10％福尔马林溶液中室温固定48h以上，然后进行脱水、石蜡包埋等。⑶采用彩色多普勒超声测定脐血流动力学参数S/D、PI、RI；采用酶联免疫吸附试验检测母体血浆 HtrA4和 Syncytin-1的表达水平；采用免疫组织化学技术（Immunohistochemistry，IHC）显微镜下观察胎盘中HtrA4和Syncytin-1的表达分布；软件进行图像分析得出平均光密度值（Mean optical Density，MOD）。⑷采用SPSS21.0统计软件进行数据分析。计量资料用均数±标准差（ x±s）表示，组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用 SNK检验。两变量之间的相互关系采用 Pearson直线相关性分析。取α=0.05作为检验水准，P<0.05为差异有统计学意义。
　　结果：①子痫前期患者脐动脉血流S/D、PI、RI值升高，与对照组相比，差异均有统计学意义（P<0.05）。早发组S/D值显著高于晚发组和对照组（均P<0.05），差异有统计学意义；早发组PI值及RI值显著高于晚发组，且晚发组高于对照组（均P<0.05），差异有统计学意义；②子痫前期患者血浆中HtrA4表达升高，而Syncytin-1表达降低，与对照组相比，差异均有统计学意义（P<0.05）。早发组HtrA4表达水平显著高于晚发组，且晚发组高于对照组（均P<0.05）。早发组Syncytin-1表达水平明显低于晚发组，且晚发组低于对照组（均P<0.05），差异有统计学意义；③HE染色结果：正常妊娠胎盘可见绒毛成熟良好，形态饱满，间质少，绒毛及绒毛间质的血管丰富，形态正常，合体滋养层细胞核排列较整齐；子痫前期患者胎盘绒毛成熟不良，绒毛血管平滑肌数量减少，可见玻璃样变，间质水肿，合体滋养层细胞细胞核排列紊乱；其中早发组胎盘绒毛数量更少，可见退变坏死，绒毛外层合体滋养层细胞大片融合；④HtrA4、Syncytin-1在子痫前期患者和正常孕妇胎盘组织中均有表达。HtrA4主要表达于胎盘绒毛小叶的合体滋养细胞及细胞滋养细胞，血管内皮细胞也有少量表达，定位于细胞膜，胞浆中也有少量表达。早发型子痫前期患者胎盘染色较晚发型子痫前期深，且二者均较正常孕妇胎盘染色深；Syncytin-1主要表达于胎盘绒毛小叶的合体滋养细胞，定位于细胞膜和细胞浆，子痫前期患者胎盘染色较正常孕妇胎盘浅，且早发组染色浅于晚发组；⑤免疫组织化学提示HtrA4、Syncytin-1在试验组和对照组胎盘中均有表达。二者的表达含量在试验组和对照组分别进行统计学分析显示：HtrA4在试验组 MOD值高于对照组，且早发组高于晚发组（均P<0.05），差异有统计学意义；Syncytin-1在试验组 MOD值低于对照组，且早发组低于晚发组（均P<0.05），差异有统计学意义；⑥母血及胎盘组织中HtrA4、Syncytin-1的相关性分析显示二者均呈负相关（r=-0.413，P<0.001；r=-0.649，P<0.01）；⑦母血及胎盘组织中HtrA4表达水平值与新生儿体重呈负相关；与脐动脉S/D、PI、RI值均呈正相关。Syncytin-1表达水平与新生儿体重呈正相关；与脐动脉S/D、PI、RI值呈负相关。
　　结论：⑴子痫前期患者母血和胎盘组织中 HtrA4水平较正常妊娠者均明显升高，且早发组高于晚发组，而Syncytin-1水平较正常妊娠者均明显降低，且早发组低于晚发组，提示HtrA4和Syncytin-1参与子痫前期的发病，且与疾病的严重程度相关。⑵子痫前期患者母血和胎盘组织中HtrA4与Syncytin-1水平均呈负相关，提示二者在子痫前期的发生发展中呈拮抗作用。⑶子痫前期患者母血和胎盘组织中HtrA4水平与新生儿出生体重、脐动脉S/D值、PI值、RI值均呈正相关，而Syncytin-1水平与新生儿出生体重、脐动脉上述指标均呈负相关。

目录

封面

目录

中文摘要

英文摘要

英文缩写

前言

材料和方法

1 研究对象与分组

2 主要仪器与试剂

3 方法

4 统计学处理

结果

1 一般情况比较

2 三组脐动脉血流动力学参数比较

3 母血中HtrA4、Syncytin-1表达水平比较

4 胎盘HE染色结果

5 胎盘免疫组化染色结果

6 母血及胎盘组织HtrA4、Syncytin-1的相关性分析

7 母血及胎盘组织HtrA4、Syncytin-1与临床指标的相关性分析

附图

附表

讨论

1 HtrA4与子痫前期的关系

2 Syncytin-1与子痫前期的关系

3 HtrA4与Syncytin-1交互作用，抑制滋养细胞融合，降低细胞侵袭作用

4 子痫前期患者母血及胎盘组织HtrA4和Syncytin-1蛋白的表达与临床指标的关系

5 研究对象的客观真实性，以及研究的局限性

6 展望

结论

参考文献

综述: HtrA与子痫前期相关性的研究进展

致谢

个人简历