高压电烧伤大鼠血清脂联素、纤维蛋白酶变化及乌司他丁干预作用

摘要

目的：高压电烧伤不仅对机体造成热力损伤，电流经过身体，电场作用对机体血管、神经各组织均造成不同程度的损伤。目前，国内外专家学者对高压电烧伤后毛细血管血流动力学改变的研究已经广泛的开展。研究表明，电烧伤后血管内皮损伤，局部及全身的炎症反应造成血流动力学异常改变，以及血栓形成造成微循环出现障碍。电烧伤后导致全身炎症反应及血流动力学改变的因素有很多，其中血浆中的脂联素(Adiponectin,ADP)、纤维蛋白酶（Brinase）在调节炎症反应及血流动力学方面有着重要的作用。脂联素是脂肪细胞分泌的一种具有多种生物学效应的蛋白类物质，它以内分泌方式循环于血液中，在机体内参与多种生命活动的调节。纤维蛋白酶以往是从米曲霉中提取的蛋白酶，能够分解血凝块的纤维蛋白和降低血浆中纤溶酶抑制物的浓度。电烧伤后对于大鼠血清纤维蛋白酶的定性及定量变化，并无相关性的研究。通过此次试验检测高压电烧伤后大鼠血清ADP、Brinase的变化，并通过乌司他丁（Ulinastatin， UTI）干预，旨在进一步探索高压电后血清 ADP、Brinase变化及其介导的炎症反应及对凝血机制的影响和干预办法。
　　方法：
　　1、实验动物分组：本实验采用健康的成年SD大鼠做为实验研究对象，大鼠由河北医科大学动物实验中心提供（合格证编号1411023），共计180只，按随机区组设计法将其分为三组，这样每组分别有60只大鼠，即假高压电烧伤组（对照组）（60只)、高压电烧伤组（电伤组）（60只）、高压电烧伤乌司他丁（UTI）治疗组（治疗组）（60只）。每一组又按观察时间的长短不同分成6个时相组，即电伤前15min、电伤后5min、电伤后1h、2h、4h、8h六个时相组，每一时相组包含10只大鼠。
　　2、实验前准备：?大鼠称重并将其编号?按药品说明配置实验药品使其达到实验所需浓度?准备采血管、采血针，记录实验数据。
　　3、高压电烧伤模型制作：将实验变压器和调压器电线连接，使其成为一个闭合回路。10％的水合氯醛（0.3ml/100g）溶液腹腔注射以麻醉实验大鼠，麻醉成功后，将大鼠四肢固定，仰卧位于专用的电击实验台上，大鼠的左上肢（电流入口）脱毛区、右下肢（电流出口）脱毛区分别连接两个1cm×1 cm电极片。确保所有实验人员远离电击可波及的区域，这时再接通电源，调节调压器旋钮，使升压器的输出电压达到2千伏，打开电源开关，使高压电流通过大鼠身体，达到电击的效果，电击时间为3s，释放闭合线路内残留的电流，将大鼠分笼放好，待采血。空白对照组（假电组）则不给于接通高压电流，其余步骤与电伤组及治疗组的处理相同。电伤组电后5min内于大鼠腹腔内注射生理盐水5ml/kg，乌司他丁治疗组电后5min内于大鼠腹腔内注射1%UTI（5ml/kg）。每组样品按时相进行采血、分离血清。
　　4、标本采集与保存：将高压电烧伤后的大鼠再次麻醉，后开胸充分暴露心脏，于心脏内直接抽血，血量约6mL，将抽出的血液注入促凝管中，静置30min，待血清析出后，离心机3000转/分钟，离心10分钟，取上清液置于Eppendorf管中于-70℃条件下保存。
　　5、指标检测：采用酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）双抗体夹心法，分别检测、计算每组大鼠的六个时相组血清ADP、Brinase含量。
　　6、实验数据处理：采用SPSS13.0统计软件，行两因素析因设计的方差分析。以P＜0.05为显著性检验水准。
　　结果：
　　1、大鼠血清ADP含量变化
　　高压电烧伤组大鼠血清ADP含量与空白对照组有显著差异，总体低于空白对照组（主效应F＝17.336，P＜0.05）；高压电伤组血清ADP含量各时相变化有显著差异（主效应 F＝20.094，P＜0.05），伤后5min～4h各时相均低于本组伤前值（P＜0.005），且呈逐渐降低那趋势，在4h时相时达到最低，并在4-8h血清ADP水平开始升高，但电伤组ADP水平仍低于空白对照组相应时相时ADP的水平。
　　治疗组血清ADP含量与电伤组有显著差异，总体高于电伤组（主效应F＝5.419，P＜0.05）；治疗组ADP含量各时相变化有显著差异（主效应F＝20.708，P＜0.05），治疗组伤后5min～8h各时相均低于本组伤前值（P＜0.05）。
　　2、大鼠血清Brinase含量变化
　　高压电伤组血清Brinase含量与空白对照组有显著差异，总体高于对照组（主效应F＝60.241，P＜0.05）；电伤组Brinase含量各时相变化有显著差异（主效应F＝59.298，P＜0.05），伤后5min～8h各时相均高于本组伤前值（P＜0.05），且呈逐渐增高趋势。
　　治疗组血清Brinase含量与电伤组有显著差异，总体低于电伤组（主效应F＝34.613，P＜0.05）；治疗组Brinase含各时相变化有显著差异（主效应F＝81.736，P＜0.05），治疗组伤后5min～8h各时相均高于本组伤前值（P＜0.05）。
　　结论：
　　高压电烧伤可影响机体ADP、Brinase的表达，从而诱导过度的炎症反应，同时使机体处于高凝状态。高压电烧伤后，早期 UTI治疗可以促使Brinase的表达降低，ADP表达增加，说明UTI可以抑制过度的炎症反应，调节凝血平衡，改善微循环血流状态，利于创面的修复。

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前言

材料与方法

1材料

2 方法

3 统计学处理

结果

1 大鼠血ADP含量变化

2 大鼠血清Brinase含量变化

附图

附表

讨论

结论

综述: 烧伤后血细胞流变性及免疫功能变化的研究进展

致谢

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