导赤承气汤治疗大肠杆菌致的大鼠急性肾盂肾炎的实验研究

摘要

目的：通过不结扎输尿管直接膀胱注射大肠杆菌的方法制作大鼠APN(急性肾盂肾炎)模型，观察各组大鼠肾脏组织以及体温、尿量、肾重系数、血常规、尿常规、尿细菌培养、血清白介素-2（IL-2）、血清 C反应蛋白（CRP）、β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶（NAG）和分泌型免疫球蛋白（SIgA）各项指标的变化，从而以实验的方法探讨导赤承气汤对 APN的影响及其作用机制，以期为中医临床应用和教学提供实验依据。急性肾盂肾炎(APN)是由各种病原微生物感染直接引起肾小管、肾间质和肾实质的炎症。临床常见畏寒发热、恶心呕吐、尿频、尿急、尿痛,小腹部的胀痛,腰部疼痛,肋脊角压痛及叩痛等。其基本的病理特点在于肾盂肾盏黏膜充血水肿,表面脓性分泌物,肾皮质有炎症病灶,肾小管上皮肿胀、脱落坏死,间有白细胞浸润等,炎症愈后有瘢痕形成等，但肾小球一般较少受损。在古医籍中虽未见明确的关于 APN的记载,但根据其临床有身热,腹满,便秘、口干、唇裂,伴见小便涓滴不畅,溺时疼痛,尿色红赤,时烦渴,舌红脉数等症候，将其归属于中医“淋证”、“癃闭”、“虚劳腰痛”等范畴。并中医从“肾与膀胱相表里”这一体现脏腑相关整体观的理论出发,将其病机特点概括为“肾虚膀胱热”。根据APN的中医病机特点，依据“肾与膀胱相表里”的理论及中医药的现代药理研究,选用导赤承气汤对大肠杆菌所致APN大鼠进行实验研究。导赤承气汤出自吴鞠通《温病条辨·中焦篇》第17条:“左脉牢坚，小便赤痛，时烦渴甚，导赤承气汤主之。”本方即能通泻大便,又能通利小便,可两解大肠与小肠之邪热,为“二肠同治”之法。临床用于阳明腑实兼小肠热盛证。而小肠热盛，下注膀胱，小便必涓滴不畅。因此，对于APN可以采用导赤承气汤甘苦化阴利小便与攻下合法而起到清热泻火、利湿通淋的作用。本研究通过观察大鼠肾脏组织以及体温、尿量、肾重系数、血常规、尿常规、尿细菌培养、血清白介素-2（IL-2）、血清C反应蛋白（CRP）、β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAG)和分泌型免疫球蛋白（SIgA）各项指标的变化，明确导赤承气汤治疗 APN的作用机制，为临床治疗APN和中医教学提供实验依据。
　　方法：⑴选用健康清洁级雄性SD大鼠28只，体重250±20g，适应性喂养3天，试验期间自由饮水，进食普通饲料，按照随机分配原则分为4组：空白组（Normal control group,K=n6）、模型组（Model group,M=n6）、导赤承气汤组（ Daochichengqi Decoction group,D=n8）、左氧氟沙星组（Levofloxacin Hydrochloride group,L=n8），其中除空白组外，其余各组均采用不结扎输尿管直接膀胱注射大肠杆菌（0.6ml）的方法制作APN大鼠模型，于实验造模后第5天处死。⑵实验给药：四组均在造模后连续给药5天，给药剂量按人与大鼠间药物折算比例系数计算得出，D组以4.9g/kg/d导赤承气汤灌胃，L组以0.06g/kg/d左氧氟沙星灌胃，K组和M组分别给予等量生理盐水灌胃，每天灌胃给药一次，给药容积为8ml/kg/d。⑶指标检测：每日上午九点，用电子体温计测量大鼠的肛温；第4天将老鼠放置于代谢笼中，收集24小时尿量，观察各组间尿量的变化；处死时称体重、肾重，用于计算肾重系数；从腹主动脉取血，检测大鼠血常规、血清白介素-2（IL-2）、血清 C反应蛋白（CRP）各项指标的变化；无菌状况下从膀胱抽取尿液，检测尿细菌培养、尿常规、β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶（NAG）和分泌型免疫球蛋白（SIgA）各项指标的变化；将纵行切开的左侧大部分肾脏组织置于10％多聚甲醛液中固定，脱水，石蜡包埋，行 HE染色，用于光镜下观察肾脏结构和变化。
　　结果：①各组大鼠指标检测结果。体温的测定结果，与空白组相比，模型组、导赤承气汤组和左氧氟沙星组造模后体温都呈上升趋势，模型组体温升高最明显，但无统计学差异(P>0.05)。与模型组相比，导赤承气汤组和左氧氟沙星组体温呈下降趋势，且左氧氟沙星组体温下降较明显，但与导赤承气汤组比较无统计学差异(P>0.05)。24小时尿量的测定结果，与空白组相比，模型组、导赤承气汤组和左氧氟沙星组尿量都增加，模型组增加的较为显著，但无统计学差异(P>0.05)。与模型组相比，导赤承气汤组和左氧氟沙星组尿量减少，但无统计学差异(P>0.05)。导赤承气汤组和左氧氟沙星组之间无统计学差异(P>0.05)。肾重系数的测定结果，与空白组相比，模型组的左肾重系数明显升高，有统计学差异(P<0.05)。与模型组相比，导赤承气汤组左/右肾重系数降低，有统计学差异(P<0.05)，左氧氟沙星组左/右肾重系数降低，有高度统计学差异(P<0.01)。但导赤承气汤组和左氧氟沙星组之间无统计学差异(P>0.05)。血常规的测定结果，白细胞及中性粒细胞的测定结果，与空白组相比，模型组白细胞水平明显升高，有统计学差异(P<0.05)。与模型组相比，左氧氟沙星组白细胞及中性粒细胞水平下降，有高度统计学差异(P<0.01)，导赤承气汤组白细胞及中性粒细胞水平下降，但无统计学差异(P>0.05)。与导赤承气汤组相比，左氧氟沙星组白细胞水平下降，有统计学差异(P<0.05)。红细胞及血红蛋白的测定结果，与空白组相比，模型组红细胞及血红蛋白水平下降，有统计学差异(P<0.05)。但导赤承气汤组、模型组和左氧氟沙星组之间无统计学差异(P>0.05)。血小板的测定结果，各组间比较无统计学差异(P>0.05)。尿常规的测定结果，尿白细胞：与空白组相比，模型组尿白细胞增多，有统计学差异(P<0.05)。与模型组相比，导赤承气汤组尿白细胞减少，有统计学差异(P<0.05)，左氧氟沙星组尿白细胞减少，但无统计学差异(P>0.05)。导赤承气汤组和左氧氟沙星组之间无统计学差异(P>0.05)。尿潜血：与空白组相比，模型组尿潜血增多，有统计学差异(P<0.01)。但模型组、导赤承气汤组和左氧氟沙星组之间无统计学差异(P>0.05)。尿细菌培养结果，与空白组相比，模型组尿培养阳性率有统计学差异(P<0.05)。与模型组相比，左氧氟沙星组尿培养阳性率有统计学差异(P<0.05)，导赤承气汤组尿培养阳性率无统计学差异(P>0.05)。导赤承气汤组和左氧氟沙星组之间无统计学差异(P>0.05)。尿SIgA的测定结果，与空白组相比，模型组尿SIgA水平降低，有统计学差异(P<0.01)。与模型组相比，导赤承气汤组和左氧氟沙星组尿SIgA水平增高，有统计学差异(P<0.01)。与导赤承气汤组相比，左氧氟沙星组尿SIgA水平较高，有统计学差异(P<0.05)。尿NAG酶的测定结果，各组间比较无统计学差异(P>0.05)。血清IL-2的测定结果，与空白组相比，模型组IL-2水平增高，无统计学差异(P>0.05)。与模型组相比，中药组 IL-2水平降低，有统计学差异(P<0.05)。导赤承气汤组和左氧氟沙星组之间无统计学差异(P>0.05)。CRP的测定结果，与空白组相比，模型组CRP水平增高，有高度统计学差异(P<0.01)。与模型组相比，导赤承气汤组 CRP水平降低，有统计学差异(P<0.05)，左氧氟沙星组 CRP水平也降低，有高度统计学差异(P<0.01)。但导赤承气汤组和左氧氟沙星组之间无显著差异(P>0.05)。②空白组大鼠肾组织结构完整，未见病理改变；模型组大鼠肾盂粘膜下及间质区可见到大量淋巴细胞灶性浸润,间质区毛细血管扩张、充血，肾小管坏死；导赤承气汤组和左氧氟沙星组肾组织病理变化较模型组明显改善，大鼠肾盂粘膜下及间质区少量淋巴细胞灶性浸润,间质区毛细血管轻度扩张，肾小管轻度坏死，血管轻度充血。
　　结论：⑴导赤承气汤能升高APN大鼠分泌型免疫球蛋白A（SIgA）水平，降低血中白细胞及中性粒细胞（WBC、N）、血清白介素-2（IL-2）、血清C反应蛋白（CRP）、尿白细胞水平,且减轻肾盂粘膜下及间质区中性粒细胞及淋巴细胞浸润、毛细血管扩张、充血及间质水肿，有一定的肾保护作用，短期治疗效果与左氧氟沙星无明显统计学差异(P>0.05)。证明导赤承气汤对APN具有一定的治疗作用。⑵导赤承气汤对APN的作用机制可能与其清热利小便通腑而起到抑菌抗炎，增强尿道局部免疫功能的作用有关。⑶实验研究证实导赤承气汤是通过抑菌抗炎、增强尿道局部免疫功能发挥其甘苦化阴利小便和攻下泻热作用，从而达到清热利湿通淋的目的。为中医教学及临床应用提供了实验依据。⑷实验研究证实在提高尿SIgA水平及抑菌抗炎方面，左氧氟沙星的疗效要优于导赤承气汤，提示在临证时应根据患者病情实际情况，分别选择适合的中西医治疗方法。但导赤承气汤以其整体治疗优势，以及毒副作用小、较少出现耐药性或其他不良反应等优势，临床可以作为治疗 APN的辅助疗法，以提高临床治愈率、减少复发率。

目录

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英文摘要

英文缩写

前言

材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

结果

1各组指标的测定结果

2光镜下肾组织病理形态学观察

3肾脏的肉眼观察

附图

附表

讨论

1 APN动物模型的探讨与建立

2 对照药物的选择

3 APN的中医病因病机分析

4 关于方剂的选择

5 导赤承气汤对APN 大鼠的影响

结论

参考文献

综述:急性肾盂肾炎的中西医研究概述

致谢

个人简历