河北地区汉族人群KIR及其HLA配体基因多态性研究

摘要

目的:杀伤细胞免疫球蛋白样受体(Killer cell Immunoglobulin-likereceptors，KIR)是自然杀伤细胞(Natural Killer cel1，NK细胞)和某些T细胞表面表达的一组蛋白受体，可通过与人类白细胞抗原(humanleukocyte antigen，HLA)-Ⅰ类分子特异性结合，调节NK细胞的活性。研究表明，KIR分子与靶细胞的HLA-Ⅰ类分子特异性识别后发挥作用，参与移植物抗宿主病(GVHD)的发生并且影响移植物抗白血病(GVL)作用，从而造成对器官移植效果的差异。因此，精确检测KIR分子与HLA-Ⅰ类分子是否相合，对于临床移植和预后评估有非常重要的意义。依据蛋白质的结构不同，KIR分子分为抑制性KIR受体和激活性KIR受体。由于激活性KIR转导的激活性信号较弱，甚至检测不到，因此，NK细胞主要通过抑制性KIR特异性结合MHC-Ⅰ类分子来传导抑制性信号从而阻止对自身细胞的杀伤作用。
　　由于KIR和HLA基因均具有高度的多态性以及它们各自独立遗传的特点，并且KIR对其HLA配体具有识别特异性，导致个体间会出现不同的受体/配体组合型。目前河北地区尚无系统性KIR基因研究数据，并且河北地区汉族人群的遗传背景具有其特异性。当前国内外研究发现，不同的遗传背景、种族溯源使得KIR/HLA-Ⅰ组合特点不尽相同。
　　本研究的目的在于应用PCR-SSP的方法，研究河北地区汉族人群KIR及其HLA配体基因多态性，并统计其基因频率。这将对临床移植供者的选择提供有力的支持，同时对了解河北汉族种族溯源有一定的意义。
　　方法:
　　1.制备基因组DNA
　　标本来自随机抽取的中国造血干细胞捐献者资料库河北分库河北籍汉族健康无血缘关系志愿者325名（已完善HLA分型数据），采用TIANGEN血液基因组DNA纯化试剂盒提取DNA，并对提取到的DNA进行纯度和浓度测定，应满足OD260/OD280比值为1.7-1.9，浓度30ng/μl左右。
　　2.基因分型
　　采用聚合酶链式反应—序列特异性引物扩增(PCR-SSP)做KIR基因检测。登陆中华骨髓库网站查询HLA-A，HLA-B的基因分型结果。
　　3.PCR产物凝胶电泳分析
　　将PCR扩增产物转移至琼脂糖凝胶电泳，在紫外/凝胶成像系统下观察结果并拍摄成像，并解释分型结果。
　　4.统计学处理
　　各KIR基因和HLA基因的基因频率均采用基因直接计数法进行计算。河北地区325名汉族人群HLA基因频率和KIR基因频率与国内其他地区人群以及国外其他地区人群基因频率的比较采用x2检验。
　　结果:
　　1325名河北地区汉族造血干细胞捐献者的已知的16个KIR基因型的基因频率如下:
　　KIR2DL1基因频率为99.38％, KIR2DL2基因频率为18.77％, KIR2DL3基因频率为99.38％，KIR2DL4基因频率为100.00％，KIR2DL5基因频率为44.00％，KIR3DL1基因频率为94.15％，KIR3DL2基因频率为100.00％, KIR3DL3基因频率为100.00％, KIR2DS1基因频率为34.15％,KIR2DS2基因频率为17.85％，KIR2DS3基因频率为18.46％，KIR2DS4基因频率为93.23％，KIR2DS5基因频率为23.08％，KIR3DS1基因频率为37.85％, KIR2DP1基因频率为99.38％, KIR3DP1基因频率为100.00％。
　　2325名河北地区汉族造血干细胞捐献者的HLA-A、B等位基因对应HLA-A Bw4、B Bw4的检测结果如下:
　　HLA-A*2301的基因频率为0.15％;HLA-A*2402的基因频率为14.31％，HLA-A*2403的基因频率为0.15％，HLA-A*2420的基因频率为0.31％; HLA-A*3201的基因频率为1.69％。HLA-B*1301的基因频率为3.85％，HLA-B*1302的基因频率为6.31％，HLA-B*13VJ的基因频率为0.15％; HLA-B*1517的基因频率为0.46％; HLA-B*2702的基因频率为0.15％，HLA-B*2704的基因频率为0.62％，HLA-B*2705的基因频率为0.92％，HLA-B*2707的基因频率为0.15％，HLA-B*2736的基因频率为0.15％，HLA-B*27YNER的基因频率为0.15％; HLA-B*3701的基因频率为2.15％，HLA-B*37AD的基因频率为0.46％; HLA-B*3801的基因频率为0.77％，HLA-B*3802的基因频率为2.00％，HLA-B*38XV的基因频率为0.62％，HLA-B*38ACNUA的基因频率为0.15％，HLA-B*38ACNUB的基因频率为0.15％; HLA-B*4402的基因频率为1.85％，HLA-B*4403的基因频率为3.08％; HLLA-B*5201的基因频率为5.23％，HLA-B*52DFT的基因频率为0.31％; HLA-B*5701的基因频率为0.92％; HLA-B*5801的基因频率为2.31％，HLA-B*58VE的基因频率为0.15％。
　　3325名河北地区汉族造血干细胞捐献者的KIR/Bw4的配对情况统计如下:
　　不含有KIR和HLA Bw4配受体对的人约占24.62％，46.77％的人群仅含有3DL1和HLA Bw4配受体对，4.62％的人群仅含有3DS1和HLABw4配受体对，24.00％的人群同时含有3DL1/HLA Bw4和3DS1/HLABw4配受体对。
　　结论:
　　1.本研究对325人份河北地区汉族造血干细胞捐献者的KIR基因分布进行统计分析，发现框架基因2DL4、3DL2、3DL3、3DP1几乎存在于所有个体中，2DL1、2DL3、3DL1、2DS4、2DP1的频率较高，均＞93.00％，而2DL2、2DS2、2DS3、2DS5的频率则较低。
　　2.抑制性的KIR/HLA在河北汉族人群中的分布更为广泛。这基本符合中国汉族人群的分布特点，但又具有自己的特点。
　　3.本次研究掌握了河北地区汉族KIR基因分布情况和KIR/HLA配对情况的第一手资料，为进一步探究KIR/HLA与疾病的关系奠定了基础。

目录

声明

摘要

前言

材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述

致谢

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