脐血维生素D结合蛋白预测早产儿早发型败血症价值的研究

摘要

新生儿败血症(Neonatal sepsis)是指发生在新生儿出生28天以内的系统性感染，其中早发型败血症(early on-set sepsis，EOS)是指发生在生后7天内的新生儿败血症，但是国外倾向于将新生儿早发型败血症定义为生后72小时内发病。早产儿（preterm infant）的特异性免疫功能不完善，是病原菌感染的高危人群，因此早产儿EOS的发病率及死亡率均高于足月儿，是目前导致早产儿死亡的主要因素之一。EOS的早期临床症状及体征均不典型，而且实验室感染指标敏感性较差，对早期临床诊断的指导意义不够理想。因此，EOS的早期诊断仍是对新生儿医师的一大挑战。脐血作为可在新生儿期获得的最早的血液标本，理论上讲脐血感染指标的检测对早期预测及诊断 EOS具有参考价值，而且脐血降钙素原（procalcitonin, PCT）、白细胞介素-6（interleukin-6，IL-6）等感染指标对早期预测、诊断EOS价值的研究已获得一定的成果。本实验在于探讨脐血维生素D结合蛋白（vitamin D binding protein， VDBP）、25-羟基维生素 D（25-Hydroxyvitamin D，25-(OH)D）、降钙素原（PCT）水平在早期预测早产儿早发型败血症中的价值。
　　维生素 D是一种脂溶性维生素，其主要生物学功能是参与体内骨及矿物质的代谢，但是维生素D在免疫调节中的重要作用近年来备受关注。VDBP是体内维生素 D代谢的主要蛋白，其主要功能是结合、转运维生素D及其衍生物，近年研究发现VDBP在炎症及机体损伤过程中发挥作用。一项关于成人败血症的研究显示败血症患者体内25-(OH)D、VDBP水平均显著低于健康组，且与疾病的不良愈后有关。另一项关于危重症患者体内VDBP研究发现患有败血症的危重症患者VDBP水平明显低于未患败血症的危重症患者，而且血清低 VDBP水平影响患者的生存率。以上结果显示在成人败血症患者中25-(OH)D、VDBP水平均降低，且均与疾病的不良愈后有关。Mehmet NC在2015年就 EOS新生儿脐血25-(OH)D水平是否降低进行研究，指出EOS新生儿脐血25-(OH)D水平明显低于正常对照组，低25-(OH)D水平可增加新生儿早发型败血症的风险。但是EOS早产儿血清VDBP水平变化目前尚未见报道。
　　目的：
　　1.通过检测早发型败血症（EOS）早产儿与对照组早产儿脐血维生素D结合蛋白（VDBP）、25羟基维生素D（25-(OH)D）、降钙素原（PCT）水平，探究脐血VDBP、25-(OH)D、PCT水平变化对早产儿EOS的预测价值及VDBP、25-(OH)D是否可作为预测早产儿EOS的新指标；
　　2.通过对比检测EOS早产儿与对照组早产儿脐血VDBP、25-(OH)D及PCT水平变化，探究脐血VDBP、25-(OH)D对早产儿EOS早期预测价值与传统指标PCT相比是否存在优势；
　　3.探究EOS早产儿及对照组早产儿血清VDBP与25-(OH)D的关系，了解两者在EOS病程中是否存在协同关系。
　　方法：
　　1.研究对象及分组
　　研究对象选取2015-10至2016-12在河北医科大学第四医院产科出生并转入河北医科大学第四医院新生儿重症监护病房（neonatal intensive care unit, NICU）的早产儿。除外存在其他系统严重畸形、遗传代谢性疾病、产伤或分娩中发生窒息缺氧；生后72小时内死亡及自动放弃治疗者；住院时疾病分类不明、出院时诊断为晚发型败血症者；标本量采集不足及血液标本溶血者。共纳入早产儿85例，记录早产儿性别、体重及胎龄等基本临床特征。根据其病情转归及胎龄分为四组，EOS组1（EOS group1，27周≤GA<34周），EOS组2（EOS group2，34周≤GA<37周），对照组1（Control group1,27周≤GA<34周），对照组2（Control group2，34周≤GA<37周）。所有入组早产儿病情变化均由河北医科大学第四医院经验丰富的新生儿科医生参与观察（包括分娩、早产儿转运、进入NICU直至出院）。新生儿早发型败血症（EOS）诊断标准按照2011年第四版实用新生儿学中的EOS诊断标准。
　　2.标本留取及制备
　　所纳入早产儿出生后立即抽取脐动脉血2-3ml，并于生后72小时内抽取外周静脉血1.5ml-2ml，诊断为早发型败血症早产儿于有效抗生素治疗10-14天后采集外周静脉血1.5ml-2ml。所有血液标本采集后离心收集血清，于-80℃低温保存待测VDBP、25-(OH)D、及PCT。
　　3.实验指标测定
　　采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附实验（enzyme-linked immunoso-rbent assay，ELISA）的方法检测血清VDBP、25-(OH)D、PCT水平；
　　4.统计学分析
　　本实验所有数据均应用统计学软件SPSS13.0进行统计学分析处理，符合正态分布的计量资料采用均数±标准差（X±S）表示，偏态分布的计量资料采用中位数（四分位数间距）（M(Q)）表示，计数资料采用率（％）表示。
　　计量资料：两样本均数的比较采用 t检验（t-test），非正态两样本比较采用Mann-Whitney U检验；相关性分析采用Spearman’s线性相关。计数资料：采用卡方检验或Fisher确切概率法。采用ROC曲线（ROC Curve）检测不同指标的诊断价值。统计学处理采用双侧检验，P<0.05视为差异存在统计学意义。
　　结果：
　　1.EOS组与对照组早产儿基本临床特征分析：两组早产儿在性别、出生体重、胎龄方面组间平衡分析均P>0.05，无统计学差异。
　　2.两组早产儿脐血VDBP、25-(OH)D及PCT水平变化：
　　EOS组与对照组早产儿脐血 VDBP、25-(OH)D水平分别为69.37±13.42、91.30±17.07ng/ml与22.09±7.13、31.01±12.63ng/ml，经t检验，差异均具有显著性（P<0.05）；PCT水平分别为131.79、95.89 pmol/L，经Mann-Whitney U检验，差异具有显著性（P<0.05）。
　　3.不同胎龄早产儿脐血VDBP、25-(OH)D、PCT水平变化：
　　EOS组：EOS1组与EOS2组早产儿脐血VDBP、25-(OH)D水平分别为65.22±12.22、76.00±12.93ng/mL与19.99±8.83、25.45±7.90ng/mL，经 t检验，差异均具有显著性（P<0.05）；PCT水平分别为138.71、110.83pmol/L，经Mann-Whitney U检验，差异具有显著性（P<0.05）。
　　对照组：对照1组与对照2组早产儿脐血VDBP、25-(OH)D水平分别为87.50±15.52、94.49±17.95ng/mL与27.52±12.86、33.94±11.91ng/mL，经 t检验，差异均无显著性（P>0.05）； PCT水平分别为95.64、89.51 pmol/L，经Mann-Whitney U检验，差异无显著性（P>0.05）。
　　4.早产儿25-(OH)D与VDBP水平相关性分析：
　　采用Spearman’s相关分析：EOS组早产儿脐血及生后72小时静脉血25-(OH)D与VDBP无明显相关性（r=0.272，P=0.086及r=0.170，P=0.299）；对照组早产儿脐血及生后72小时静脉血25-(OH)D与VDBP均呈正相关（r=0.315，P=0.033及r=0.303，P=0.041）。
　　5.EOS组与对照组早产儿生后72小时静脉血VDBP、25-(OH)D、PCT水平变化：
　　EOS组早产儿与对照组早产儿生后72小时静脉血VDBP、25-(OH)D分别为64.60±11.32、93.96±14.25ng/mL与23.52±6.03、34.23±10.71ng/mL，经t检验，差异均具有显著性（P<0.05）；PCT水平分别为186.48、125.29 pmol/L，经Mann-Whitney U检验，差异具有显著性（P<0.05）。
　　6.EOS早产儿生后72小时静脉血与应用抗生素后静脉血 VDBP、25-(OH)D、PCT水平变化：
　　EOS组早产儿生后72小时静脉血、应用抗生素后静脉血的VDBP、25-(OH)D水平分别为64.60±11.32、91.09±12.99ng/ml与23.52±6.03、28.52±8.46ng/ml，经 t检验，差异均具有显著性（P<0.05）；PCT水平分别为186.48、89.83 pmol/L，经Mann-Whitney U检验，差异具有显著性（P<0.05）。
　　7.脐血VDBP、25-(OH)D、PCT对EOS预测的临床价值：
　　以脐血VDBP、25-(OH)D、PCT绘制ROC曲线，曲线下面积（AUC）分别为0.777（95%CI0.678~0.876）、0.807（95%CI0.710~0.904）、0.840（95%CI0.754~0.926），提示脐血VDBP、25-(OH)D、PCT均具有早期预测早产儿EOS的价值。
　　结论：
　　1.脐血VDBP、25-(OH)D、PCT水平变化均具有早期预测EOS的价值。
　　2.EOS早产儿脐血及生后72小时静脉血VDBP、25-(OH)D水平明显降低，且抗生素治疗后其水平明显升高，提示有望成为早期预测、诊断早产儿EOS及评估疗效的新指标。
　　3.对照组早产儿脐血及生后72小时静脉血中VDBP与25-(OH)D呈正相关，EOS组早产儿脐血及生后72小时静脉血中VDBP与25-(OH)D无明显关系，提示在正常生理状态下VDBP与25-(OH)D水平具有相互作用，但在EOS病程中VDBP与25-(OH)D无协同关系。

目录

声明

英文缩写

前言

材料与方法

1 研究对象

2 标本采集及检测

3 统计学分析

结果

附图

附表

讨论

1 早产儿EOS的诊断标准

2 正常早产儿脐血25-（OH）D、VDBP、PCT水平变化

3 EOS早产儿脐血25-(OH)D、VDBP、PCT水平变化

4 EOS早产儿生后72小时及应用抗生素后静脉血25-(OH)D、VDBP、PCT水平变化

5 早产儿血清25-(OH)D与VDBP的相关性分析

结论

参考文献

综述:新生儿早发型败血症的早期诊断研究新进展

致谢

个人简历