蛋氨酸对噪声导致的听力损害保护及治疗的研究

摘要

第一部分噪声对动物造成的听力损失及药物防治研究
　　目的：
　　噪声严重影响听力，在所有聋病中噪声性聋（Noise induced hearing loss,NIHL）占有很高的比例，而其现有的保护及治疗措施却不能达到满意的效果。蛋氨酸是人体8种必需氨基酸之一，在维持健康状态中发挥重要作用，其分子中含有甲基，是体内代谢、合成过程的甲基供体。蛋氨酸及其代谢产物的抗氧化作用也对DNA及蛋白质起到了保护作用。人体组织细胞广泛存在由连接蛋白组成的缝隙连接（Gap junction,GJ)，而连接蛋白26(Connexin26,Cx26)及连接蛋白30Connexin30,Cx30)是内耳中组成缝隙连接的重要组成部分，在耳蜗发育及功能维持方面起到重要做用。本文通过制作噪声聋动物模型，应用听觉脑干反应（Auditory brainstem response,ABR）检测、免疫荧光组织化学染色等方法来研究噪声对耳蜗组织的损害及蛋氨酸对其保护及治疗作用，另外，观察Cx26、Cx30在此过程中的变化。
　　方法：
　　40只雌性昆明小鼠，随机分为4组：
　　①空白对照组(n=10)。
　　②纯噪声组(n=10)。
　　③保护组，蛋氨酸+噪声(n=10)。
　　④治疗组，噪声+蛋氨酸(n=10)。
　　①：自由生活，实验组给药同时按同等体重量给予腹腔注射生理盐水3天。
　　②给予小鼠白噪声，107—110dB,10小时/天，连续3天。同样按同等体重量给予腹腔注射生理盐水3天。
　　③腹腔注射2.5％D-蛋氨酸，按600mg/Kg体重给药，1次/天，连续3天，之后给予白噪声，107—110dB,10小时/天，连续3天。
　　④给予白噪声，107—110dB,10小时/天，连续3天。之后腹腔注射2.5%D-蛋氨酸(D-methionine,D-Met)，按600mg/Kg体重给药，1次/天，连续3天。四组小鼠造模前后均行ABR检测来评估小鼠听力水平。在最后一次ABR检测后在将小鼠麻醉，心脏灌注，显微镜下迅速取小鼠耳蜗。耳蜗组织铺片或切片，行抗肌球蛋白-Ⅵ(Myosin-Ⅵ，Myo-Ⅵ)免疫荧光染色，观察毛细胞丢失情况；抗Connexin26及抗Connexin30免疫荧光染色，观察耳蜗连接蛋白的表达的变化情况。进而研究蛋氨酸在以上方面对噪声导致的听力损失有无保护及治疗作用。利用SPSS22软件进行统计学分析，结果以均数±标准差的形式表达，以P＜0.05为结果存在显著性差异的检验标准。
　　结果：
　　1.一般观察结果：对照组动物正常成长，活泼好动，耳廓对声反应敏锐。纯噪音组小鼠略显消沉，耳廓反应迟钝，消瘦。保护组及治疗组小鼠略显躁动，耳廓反应可。
　　2.听觉脑干反应(ABR)测试结果：实验前各组实验动物听力阈值无统计学差异；实验后四组小鼠ABR阈值分别为：空白对照组：15.50±4.38dB SPL，纯噪声组：40.00±14.14dB SPL，保护组：28.06±9.57dB SPL，治疗组：22.81±4.82dB SPL，四组之间两两比较，保护组和治疗组无统计学差异(P＞0.05)，其它两两比较均有统计学意义(P＜0.05)。空白对照组造模前后阈值变化无统计学意义(P＞0.05)，故可排除年龄相关的耳聋因素。
　　3.抗myosin-Ⅵ染色结果：四组标本基底膜铺片染色后观察，对照组内、外毛细胞排列整齐，无毛细胞倒伏、变性、缺失的情况。纯噪声组外毛细胞出现排列错乱，轮廓模糊，变性、缺失的情况，内毛细胞未见损坏。保护组和治疗组内毛细胞(Inner hair cells,IHC)未见损坏，外毛细胞(Outer hair cells,OHC)可见散在缺失，结构较清晰。外毛细胞计数计算毛细胞存活率，各组之间存活率两两比较均有统计学差异(P＜0.05)。
　　4抗Connexin26及Connexin30免疫荧光组织化学染色结果：对照组基底膜、血管纹及螺旋韧带部位有丰富的Connexin26和Connexin30蛋白表达；纯噪声组耳蜗基底膜(basilar membrane,BM)、血管纹(stria vascularis,SV)及螺旋韧带(spiral ligament,SL)部位的Cx26及Cx30蛋白表达出现显著下降；保护组及治疗组耳蜗组织基底膜、血管纹及螺旋韧带Cx26及Cx30蛋白表达亦有不同程度的下降，但较纯噪声组下降程度轻。
　　第二部分强噪声对人耳造成的听力损害及药物防治研究
　　目的：
　　噪声严重影响人们生活质量，长期接触高强度噪声或短暂爆炸性剧烈噪声均会造成噪声性耳聋(Noise Induced Hearing Loss, NIHL)，目前对噪声导致的听力损失的保护及治疗的措施仍处于探索阶段。由于人体耳蜗组织研究的限制性，本文欲通过回顾性分析近十年内因爆震导致听力损伤的患者的诊治过程及听力特点，结合本课题中动物实验部分的组织学研究，来探索治疗因噪声导致的听力损失的有效方法。
　　方法:
　　本课题通过收集自2007-2016年10年间因爆震伤就诊于白求恩国际和平医院并入院治疗的75例106耳部队官兵患者。通过采集患者基本信息、听力检查结果及治疗方法，来分析与爆震性聋(Explosive Deafness,ED)预后及其相关因素。
　　结果：
　　1.经过7-15天的综合治疗后，有16耳痊愈，33耳不同程度好转，57耳无效，总有效率为46.23%。伴耳鸣、耳闷、耳痛症状者，经治疗后上述症状有不同程度的减轻。
　　2.预后与发病时长的关系：患者治疗效果随发病时间越长，效果越不好，治疗的总有效率越低。
　　结论：
　　1.噪声可导致听力损失，并可从形态学上反映出来，且蛋氨酸对噪声性聋有保护和治疗作用；
　　2.连接蛋白Connexin26及Connexin30参与了噪声导致的听力下降的发病机制，并可从免疫荧光组织化学染色体现出来；
　　3.蛋氨酸对噪声导致的Connexin26及Connexin30表达下降有一定的保护及治疗作用。
　　4.爆震性耳聋的预后与治疗干预时间有密切关系，治疗越及时，越有可能达到好的效果。
　　5.目前对爆震性耳聋的治疗方法有效，但总体有效率不高，治疗方法仍需改善提高。

目录

声明

英文缩写

引言

第一部分噪声对动物造成的听力损失及药物防治研究

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

第二部分强噪声对人耳造成的听力损害及药物防治研究

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

结论

综述:耳鸣习服疗法

致谢

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