Ptch-1和Smo在不同级别胶质瘤中的表达及相关性研究

摘要

目的：研究SHH信号通路中Ptch-1蛋白和Smo蛋白在不同级别胶质瘤及正常脑组织中的表达情况及其相关性。
　　方法：
　　1.收集我院神经外科2014年至2016年手术获得胶质瘤患者标本（依据《中国中枢神经系统胶质瘤诊断和治疗指南》中WHO中枢神经系统肿瘤分类将胶质瘤分为 WHOⅠ-Ⅳ级，Ⅰ、Ⅱ级为低级别胶质瘤，Ⅲ、Ⅳ级为高级别胶质瘤。故将实验分为高级别胶质瘤组和低级别胶质瘤组）。
　　2.将不同级别的胶质瘤组织共65例（其中高级别胶质瘤组41例，低级别胶质瘤组24例）及正常脑组织共10例，经甲醛固定待用。不同级别的胶质瘤组织共20例（其中高级别胶质瘤10例，低级别胶质瘤10例）及正常脑组织共10例，冻存于-80℃冰箱待用。（正常脑组织标本均来自神经外科颅脑外伤患者需行减压的正常脑组织，术前已告知患者家属标本的用途并取得患者家属同意）
　　3.应用免疫组织化学检测Ptch-1蛋白及Smo蛋白在不同级别的胶质瘤组和正常脑组织组中的表达水平。
　　4.应用qRT-PCR技术检测Ptch-1蛋白及Smo蛋白的mRNA在不同级别的胶质瘤组和正常脑组织组中的表达水平。
　　5.应用蛋白质免疫印迹实验（Western Blot）检测Ptch-1蛋白及Smo蛋白在不同级别的胶质瘤组和正常脑组织组中的表达水平。
　　6.应用统计软件IBM SPSS21.0对实验数据进行统计分析。
　　结果：
　　1.免疫组化实验结果：Ptch-1蛋白的表达水平：低级别胶质瘤组阳性表达率为62.5％（15/24），高级别胶质瘤组阳性表达率为92.7%（38/41），两者之间的阳性表达率差异有统计学意义（P＜0.05）。正常脑组织组中Ptch-1蛋白的阳性表达率为10%（1/10）。低级别胶质瘤组和高级别胶质瘤组阳性表达率与正常脑组织组的阳性表达率差异均有统计学意义（P＜0.05）。Smo蛋白的表达水平：低级别胶质瘤组阳性表达率为75.0%（18/24），高级别胶质瘤组阳性表达率为95.1%（39/41），两者之间的阳性表达率差异有统计学意义（P＜0.05）。正常脑组织中 Smo蛋白的阳性表达率为：20%（2/10）。正常脑组织组的阳性表达率分别与低级别胶质瘤组、高级别胶质瘤组之间差异有统计学意义（P＜0.05）。
　　2.qRT-PCR实验结果：各组中均可见目的蛋白mRNA的表达。其中低级别胶质瘤组Ptch-1 mRNA相对表达量是0.0018364±0.0015966，高级别胶质瘤组Ptch-1 mRNA相对表达量是0.0027659±0.0028038，两者之间差异无统计学意义（P=0.374＞0.05）。正常脑组织组Ptch-1 mRNA相对表达量是0.0006005±0.0005233。正常脑组织组分别和低级别胶质瘤组、高级别胶质瘤组之间的相对表达量差异有统计学意义（P＜0.05）。Smo mRNA在高级别胶质瘤组的相对表达量是0.0078187±0.0054682，其在低级别胶质瘤组的相对表达量是0.0037597±0.0016477，两者之间相对表达量差异有统计学意义（P＜0.05）。Smo mRNA正常脑组织组相对表达量是0.0007974±0.0005546，正常脑组织组和低级别胶质瘤组、高级别胶质瘤组之间相对表达量差异均有统计学意义（P＜0.05）。
　　3.Western Blot实验结果：Ptch-1的相对表达量在低级别胶质瘤组中是0.4771±0.1187，在高级别胶质瘤中为0.6967±0.1880，两者之间差异有统计学意义（P＜0.05）。Ptch-1在正常脑组织组中相对表达量为0.3155±0.1314。正常脑组织组与低级别胶质瘤组及高级别胶质瘤组之间相对表达量差异均有统计学意义（P＜0.05）。Smo的相对表达量在低级别胶质瘤组中为0.4976±0.1039，高级别胶质瘤组为0.6477±0.1730，二者之间的差异有统计学意义（P＜0.05）。正常脑组织中 Smo相对表达量为0.2703±0.0914。正常脑组织组与低级别胶质瘤组和高级别胶质瘤组之间的相对表达量差异均有统计学意义（P＜0.05）。
　　4.Ptch-1和Smo蛋白相关性统计：在qRT-PCR实验中，Ptch-1和Smo蛋白的相关系数为：R=0.514（P＜0.05）；在Western Blot实验中，Ptch-1和Smo蛋白的相关系数为：R=0.655（P＜0.05）。
　　结论：
　　1.Ptch-1、Smo在胶质瘤及正常脑组织中均有表达，但在胶质瘤组织中表达水平显著高于正常脑组织，提示SHH信号通路在胶质瘤中普遍处于激活状态，其可能参与了胶质瘤的发生。
　　2.在高级别胶质瘤中Ptch-1、Smo的表达水平较低级别胶质瘤显著增高，提示随着SHH信号通路的激活水平的增高，胶质瘤的级别增高即恶性程度亦显著增高。

目录

声明

英文缩写

前言

材料和方法

1 收集标本

2 实验试剂和仪器

3 实验数据统计软件

4 各组实验步骤

5 统计分析

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述:SHH信号通路与胶质瘤的相关研究进展

致谢

个人简历