microRNA-490-3p在结肠癌组织中的表达与临床意义及其对结肠癌细胞生物学行为的影响

摘要

背景：
　　结肠癌对人们健康有着极大危害，是癌症相关死亡率位列第三位的恶性肿瘤。虽然早期的结肠癌5年生存率大约为90％，但在转移性结肠癌中其生存率下降至15%。侵袭转移是其最常见的致死原因。结肠癌是多步骤、多阶段和多基因参与的细胞遗传性疾病。
　　microRNA(miRNA)是一种普遍存在于动植物体内的单链RNA，约由21-24个核苷酸组成的内源性非编码的小分子RNA，可影响靶基因的表达，抑制某种蛋白质的合成，从而发挥生物学功能。
　　microRNA-490(简称miR-490)是miRNAs家族中的一员，是近年来研究较多的一种miRNA，位于7号染色体。研究表明miR-490-3p可以抑制多种肿瘤的发生发展。如miR-490-3p可以抑制卵巢癌的发生发展，在胃癌中miR-490-3p的低表达可以通过修饰染色质以增强幽门螺旋杆菌的致癌作用，miR-490-3p也可抑制肺癌细胞的增殖等。
　　虽然有研究报道 miR-490-3p在结肠癌中呈现低表达，然而miR-490-3p的低表达与患者的临床病理特征、预后之间的关系以及miR-490-3p对结肠癌细胞的生物学行为的影响仍不十分清楚。本研究就miR-490-3p在结肠癌发生发展的作用进行研究。
　　目的：
　　1.研究miR-490-3p在结肠癌组织中的表达情况及与临床病理指标和患者预后的关系；
　　2.探索miR-490-3p对结肠癌细胞SW480细胞生物学行为的影响及作用。
　　材料和方法：
　　1.材料
　　1.1.组织标本：选取2010年7月至2010年12月有完整病理资料的配对的结肠癌患者肿瘤原发灶和相应癌旁正常黏膜组织标本40例；
　　1.2.细胞系：SW480细胞系；
　　1.3.miR-490-3p模拟物及其对照物。
　　2.方法
　　2.1.qRT-PCR方法检测miR-490-3p在组织中的表达，分析其与临床病理指标和预后的关系；
　　2.2.Transwell侵袭实验评估细胞侵袭能力；
　　2.3.细胞周期实验（PI染色法）检测细胞周期；
　　2.4.平板克隆形成实验评估细胞克隆形成能力；
　　2.5.Western Blot实验检测EMT相关蛋白的表达变化；
　　2.6.统计学方法：卡方检验分析miR-490-3p的表达与临床病理指标的关系，采用Kaplan-Meier法进行生存分析，两两比较采用非配对t检验， P<0.05被认为差异具有统计学意义。
　　结果：
　　1.结肠组织标本中miR-490-3p表达情况及临床病理特征、生存分析
　　与相对应的正常结肠黏膜组织相比，40例结肠癌组织中miR-490-3p显著低表达（0.87±0.17vs.1.97±0.39，P=0.01）。对40例结肠癌miR-490-3p表达与患者的临床病理特征分析，结果显示miR-490-3p表达与TNM分期和远处转移具有相关性（TNM分期：P=0.025；远处转移：P=0.048）。生存分析显示癌组织中microRNA-490-3p低表达者（23例）的平均生存时间明显低于高表达患者（17例），差异有统计学意义（?2=5.55，P=0.018）。
　　2.转染后两组细胞中miR-490-3p的表达情况
　　RT-PCR结果显示细胞转染miR-490-3p模拟物（miR-490-3p mimics，简称m490）后细胞内的miRNA-490-3p水平明显高于转染miR-490-3p阴性对照模拟物的细胞（miR-490-3p mimics Negative Control，简称mNC），差异有统计学意义（m490组vs. mNC组：1.04±0.17vs.58.97±3.04， P<0.001）。
　　3.转染miR-490-3p模拟物后，miR-490-3p对结肠癌细胞SW480生物学行为的影响
　　3.1.过表达miR-490-3p对结肠癌细胞SW480侵袭能力的影响
　　与对照组转染miR-490-3p mimics Negative Control（mNC组）比较，转染miR-490-3p mimics（m490组）后结肠癌细胞SW480侵袭转移能力显著降低（m490组vs. mNC组:134.80±23.76vs.214.55±9.55，P=0.048）。
　　3.2.过表达miR-490-3p后结肠癌细胞SW480EMT相关蛋白的表达情况
　　进一步验证上述结果，对几种EMT相关蛋白进行检测。神经性钙粘附蛋白（N-cadherin）、基质金属蛋白酶（MMP2）、波形蛋白（Vimentin）在上调 miR-490-3p后其表达量显著降低，而上皮性钙粘附蛋白（E-cadherin）则表达增加，差异有统计学意义（m490组vs. mNC组：N-cad:0.93±0.05vs.1.07±0.05，P=0.01，E-cad:1.20±0.09vs.0.89±0.09， P<0.001，MMP2:0.91±0.075vs.1.10±0.09，P<0.001，vinmentin:0.84±0.10vs.1.16±0.10，P<0.001），EMT相关蛋白的检测结果与transwell细胞侵袭实验相一致。
　　3.3.过表达miR-490-3p对结肠癌细胞SW480克隆形成能力的影响
　　与对照组（mNC组）比较，转染miR-490-3p mimics（m490组）后的结肠癌细胞SW480克隆形成能力显著减弱（m490组vs. mNC组:117±9.17vs.145.30±13.80，P=0.04），差异有统计学意义。
　　3.4.过表达miR-490-3p对结肠癌细胞SW480细胞周期的影响
　　本研究发现转染miR-490-3p mimics后，产生G2-M期阻滞的结肠癌细胞SW480明显增多，差异有统计学意义：G2-M期分布（m490组vs. mNC组:5.72±0.62 vs.2.97±1.84, P=0.034）。
　　结论：
　　1.miR-490-3p在结肠癌组织中显著低表达，与肿瘤的TNM分期和远处转移相关；miR-490-3p表达水平低的患者预后较差；
　　2.转染miR-490-3p mimics可抑制结肠癌细胞的侵袭,减弱其克隆形成能力,并使癌细胞发生G2-M期阻滞，miR-490-3p可能成为结肠癌潜在的新靶点。

目录

声明

英文缩写

前言

材料与方法

1 材料

2 方法

结果

1 结肠组织标本中miR-490-3p表达情况及临床病理特征、生存分析

2 转染后两组细胞中miR-490-3p的表达情况

3 转染miR-490-3p mimics后过表达miR-490-3p对结肠癌细胞SW480生物学行为的影响

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述:结肠癌miRNA的部分研究及其相关肿瘤抑制通路的调节

致谢

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