花粉质膜外表面钙调素结合特性及化学发光免疫法定量钙调素的研究

摘要

该文以完整百合花粉原生质体为材料,应用<'125>I-钙调素和地高辛标记钙调素作探针,检测了百合花粉原生质体质膜外表面的钙调素结合特性,并结合化学交联法,检测了质膜外表面钙调素结合蛋白的分子量.得到以下初步结论:用不同方法标记的几种钙调素探针可以用于不同方法检测钙调素的结合位点.以地高辛标记钙调素和<'125>I-钙调素为探针,采用共价交联法在完整花粉原生质体膜外表面检测到一个100~110kDa的交联复合物.应用<'125>I-钙调素为探针对膜表面的钙调素结合特性的研究显示完整花粉原生质体与不同浓度的<'125>I-钙调素结合具有剂量依赖效应.不同浓度的未标记钙调素可竞争<'125>I-钙调素与完整花粉原生质体的结合,提示钙调素与完整花粉原生质体表面的结合具有特异性.此外,该文还用发光物质N-氨基丁基-N-乙基异鲁米诺,采用碳二亚胺缩合法,成功地标记了动物及植物钙调素,建立了化学发光免疫法定量植物钙调素的新方法.该法灵敏度高、重复性好.检出范围30~3000ng/ml,检出下限为3ng/管.重复性试验显示批内变异系数为4.6~13.2﹪,批间变异系数为9.3~16﹪,各项指标均与放射免疫法测定钙调素含量相媲美,同时避免了放射性元素的污染.与此同时,对一种抗植物钙调素抗体和三种动物钙调素抗体在免疫学定量中的不同特性做了比较研究.

目录

缩写表

第一章花粉质膜外表面钙调素结合特性的研究

文献综述

1细胞外钙调素的研究进展

2受体研究方法及植物细胞受体研究的进展

前言

材料与方法

1材料及试剂

2方法

结果及分析

1几种标记CAM探针的制备及结合性质鉴定

2百合花粉原生质体的分离纯化及鉴定

3化学交联法检测完整百合花粉原生质体质膜外侧CaM结合位点

4百合花粉原生质体质膜外表面的CaM结合特性

讨论

参考文献

第二章化学发光免疫法定量钙调素的研究

文献综述

1钙调素的基本特性

2常用的钙调素定量方法

3化学发光免疫分析法—一种新的免疫分析技术

前言

材料和方法

1材料与试剂

2方法

结果及分析

1钙调素发光标记物的制备及标记物质量鉴定

2建立化学发光免疫测定法定量钙调素

3几种抗钙调素抗体在免疫学定量方法中的应用

讨论

参考文献

结论

致谢