小麦（Triticum aestivum L.）苗期水分胁迫诱导表达差异cDNA的研究

摘要

该研究以小麦旱选10号为材料,用16﹪(ψ=-0.5MPa)PEG-6000溶液处理其幼苗,采用mRNA差异显示技术和银染技术,对经过不同胁迫时间诱导表达的小麦基因进行分离,共得到差异表达的cDNA片段52条.方法是:用16﹪(ψ=-0.5MPa)PEG-6000溶液处理小麦幼苗,用去离子水培育幼苗做对照;分别提取处理和对照幼苗的总RNA,反转录后进行PCR扩增,PCR产物经6﹪的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,银染显色后可观察到清晰的条带.差异显示的PCR产物长度绝大部分在150bp到750bp之间.所回收的52条差异带,经Reverse Northern.验证后,得到阳性表达的cDNA片段15个,其中包括4个

目录

缩略词

摘要

ABSTRACT

前言

综述

1、作物抗旱性研究现状

2、基因分离

3、mRNA差异显示技术的应用及发展

3.1mRNA差异显示技术的应用

3.2mRNA差异显示技术的发展

材料和方法

一材料

二、实验方法

1、总RNA的提取和鉴定

2、反转录

3、PCR扩增

4、电泳

5、银染程序

6、cDNA差异片段的回收及二次扩增和单引物阴性对照实验

7、Reverse Northern

8、cDNA差异片段克隆测序及同源性比较

结果与分析

1、小麦幼苗的培养与处理

2、植物材料总RNA的检测

3、mRNA差异显示银染显色检测

4、cDNA差异片段回收后二次扩增和单引物阴性对照实验检测

5、Reverse Northern检测

6、cDNA差异片段的克隆

7、重组质粒的鉴定

8、测序

9、测序结果在GenBank的查询比对

讨论和结论

参考文献

致谢及资助