猪红细胞自身全血凝集双功能试剂的研制

摘要

利用杂交瘤技术研制出抗猪红细胞膜非凝集型单克隆抗体,对单克隆抗体的特性进行鉴定，通过化学偶联制备双功能试剂，探索了氯霉素残留快速检测方法，为食品安全快速检测提供技术借鉴。 从健康猪血中离心分离猪红细胞膜蛋白作免疫原，免疫BALB/c小鼠，取免疫脾淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞SP2/0作融合实验，细胞比例为6：1；融合后的细胞经早期培养，ELISA初筛和玻片红细胞凝集试验剔除凝集型单抗，筛选出的阳性细胞，采用有限稀释法进行多次克隆、扩培、冻存；制备无血清细胞培养上清，常规法制备腹水；辛酸-硫酸铵沉淀法结合DEAE离子交换树脂对腹水进行纯化，制备单克隆抗体。通过两次融合试验，融合率85%，间接ELISA共筛选出5株抗猪红细胞的杂交瘤细胞株,通过凝集试验剔除2株凝集型细胞株，共获得3株抗猪红细胞非凝集型单克隆抗体细胞株，分别命名为：1C-1、1C-2、2C-1。 采用间接ELISA法、间接抗球蛋白实验、白蛋白铺层实验，对无血清培养上清的效价测定，三种细比较表明，间接ELISA法灵敏度最高，间接抗球蛋白法次之，白蛋白铺层法最次，确定试管法间接抗球蛋白血凝试验测定腹水抗体效价；腹水抗体效价在1：80-1：320之间，其中2C1凝集效价比较高，达到1：320；单抗经多次冻存、传代后，稳定分泌抗体；采用双向琼脂扩散和间接ELISA法测定单抗亚型，结果表明，3株单抗均为IgG，IgG1亚型；秋水仙素阻断法测定单抗细胞染色体数在95-106之间；抗体经辛酸-硫酸铵和DEAE离子交换树脂纯化后可达到电泳纯；与其它种属无交叉反应；3株单抗均达到临床使用的ABO单克隆抗体试剂（IgM）的亲和力标准，其中2C1亲和力最高；具有免疫学活性。 酶解还原法制备Fab片段。羰基二咪唑法合成BSA-CAP结合物，测定蛋白浓度，在戊二醛的作用下抗氯霉素单克隆抗体和Fab片段偶联，制备双功能抗体，测定其效价、耐热性、耐冻溶性，偶联后抗猪红细胞膜Fab片段和抗氯霉素抗体均保持良好的活性，探索了自身红细胞凝集抑制试验测氯霉素残留的方法。 制备了3株抗猪红细胞膜非凝集型单克隆抗体，对单克隆抗体的特性进行了全面的鉴定，探索了氯霉素残留自体红细胞凝集抑制试验快速检测方法，可为其他动物源食品中有害物质的检测提供技术借鉴，对食品安全监控提供技术支持。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:缩略词

第一章 前 言

第二章 猪红细胞膜非凝集型单克隆抗体的制备

第三章 单克隆抗体的初步鉴定

第四章 红细胞双功能试剂的制备及在食品安全检测中的初步应用

第五章 结论与展望

致 谢

参考文献

附录1 攻读硕士学位期间发表论文目录