中药对动物噪音应激诱导流产的安胎作用及机理

摘要

本试验旨在研究自拟中药对小鼠噪音应激诱导流产的安胎作用及机理保护作用。本文通过两部分试验来探讨中药对小鼠噪音应激诱导流产的安胎作用及机理。
　　 一、噪音诱导小鼠流产模型的建立。将妊娠小鼠随机分为6组。A组小鼠常规饲养,为空白对照组;B,C,D,E和F组小鼠于孕3d开始,每天每组分别用120分贝(Decibel,dB)、100dB、80dB、60dB和40dB的噪音刺激5h,连续7d。各组试验鼠于孕第10d剖杀,记录胚胎发育情况、胚胎着床数和死胚数,计算试验各组的流产率、胚胎吸收率。结果表明,各组小鼠因噪音应激均可引起流产。A组,流产率为0.0％,胚胎吸收比率5.49%;B组,120dB导致绝大多数妊娠小鼠流产,妊娠剖检,子宫内无胎儿,无法计算死胎数;C组,小鼠胚胎吸收率为92.77%,妊娠第10d剖检可见100%的妊娠小鼠流产。D组、E组和F组流产率分别是50%、20%和10.0%,胚胎吸收比率分别是44.83%、8.89%和6.52%。因此小鼠从孕3d到第8d,每天用100dB噪音刺激5h,第10d剖检,确定为噪音诱导小鼠流产模型的噪音刺激强度和刺激时间。
　　 二、自拟中药防治噪音诱导小鼠流产的安胎作用及机理研究。将受孕小鼠随机分为6组。Ⅰ组为正常对照组,Ⅱ组为噪音模型组。Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ组于小鼠孕第3d开始,每天每只用100dB的噪音刺激5h,连续7d,各组试验鼠于孕第10d剖杀。Ⅰ、Ⅱ组小鼠于孕第4-8d每天灌服PBS0.4mL;Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ,Ⅵ组小鼠于孕第4-8d每天分别各灌石菖蒲煎剂、槲皮素+乙酸龙脑酯药液、黄芩+白术及自拟中药组方煎剂各0.4mL。所有试验鼠均于孕10d时眼球摘除放血后颈椎脱臼处死。打开腹腔,暴露子宫,观察子宫生长情况,记录胚胎着床数和发生胚胎吸收的死胚数。在冰盒上取出完整子宫,剪下周围脂肪及附属物,称重,然后纵向剖开子宫腔,剥离胎儿、胎膜后再称量子宫净重。右侧子宫剪下后称重,加入6倍量含蛋白酶抑制剂0.751μg/mL的pH7.4磷酸缓冲液,在冰水环境中立即进行子宫组织匀浆,4℃,12000rpm,离心15min。取出上清液分装,于超低温冰箱-80℃保存,用于测定IL-2,IFN-γ,IL-4,IL-10和NOS。
　　 结果表明,自拟中药对噪音诱导妊娠小鼠流产有一定保胎作用。Ⅰ组无噪音影响,流产率为0.0%,胚胎吸收比率6.45%;Ⅱ组100dB导致绝大多数妊娠小鼠流产,妊娠剖检,子宫内无胎儿,无法计算死胎数。Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ和Ⅵ组小鼠于孕第4-8d每天分别各灌石菖蒲煎剂、槲皮素+乙酸龙脑酯药液、黄芩+白术及自拟中药组方煎剂各0.4mL,流产率分别是50.0%、80.0%、50.0%、30.0%胚胎吸收比率分别是48.15%、72.94%、50.00%、13.18%。Ⅲ和Ⅴ组小鼠流产率、胚胎吸收率显著低于Ⅱ组(p<0.05);Ⅴ组小鼠流产率、胚胎吸收率与Ⅱ组差异不显著(p>0.05);Ⅵ组小鼠流产率、胚胎吸收率显著低于Ⅱ组(p<0.01)。Ⅵ组与其它中药组之间差异显著(p<0.05)。说明白拟中药对噪音诱导流产保胎具有一定的效果。
　　 小鼠子宫组织匀浆中的IL-2、IFN-γ、NOS的活性含量Ⅵ组高于Ⅰ组(p<0.01),Ⅵ组低于Ⅱ组(p<0.05),Ⅲ组和Ⅴ组明显高于Ⅰ组(p<0.05),Ⅲ组和Ⅴ组低于Ⅱ组(p<0.05),Ⅳ组高于Ⅰ组,差异极显著(p<0.01),Ⅳ组稍低于Ⅱ组,无明显差异(p>0.05),与Ⅲ和Ⅴ组差异显著(p<0.05)与Ⅵ差异极显著(p<0.01)。Ⅵ组低于Ⅱ组,差异极显著(p<0.01)。同样IL-4、IL-10小鼠子宫组织匀浆中含量低于Ⅰ组和高于Ⅱ组。Ⅵ组与其它中药组之间差异显著(p<0.05)。
　　 结论:本试验用噪音诱导小鼠流产,随着噪音分贝的增大,小鼠的流产率和胚胎丢失率逐渐增高,使小鼠大部分发生流产。胚胎吸收率上升,使小鼠机体Th1/Th2平衡偏向Th1型反应,导致免疫排斥而诱发小鼠流产,对生产中常见的噪音造成的妊娠失败而言,是良好的实验模型。石菖蒲煎剂、槲皮素+乙酸龙脑酯药液、黄芩+白术及自拟中药组方流产率、胚胎吸收率低于噪音模型组。因此,自拟中药对噪音诱导小鼠流产具有一定保胎作用。