尖镰孢不同专化型的鉴定与遗传多态性分析

摘要

尖镰孢（Fusarium oxysporumSchl.）是一种土传病原真菌，遍布全球，它的寄主范围相当广泛。根据其寄主专化性可分为不同的专化型。一直以来对于多种尖镰孢专化型的鉴定没有简单有效的方法。本研究通过致病力测定法鉴定出几种尖镰孢专化型。以这几种专化型为基础:首先，测定它们的脂肪酸组成及含量并建立以脂肪酸为指标的判别模型;其次，开发尖镰孢基因组SSR引物并测定已知专化型菌株的基因型，判断不同专化型菌株基因型间的异同。旨在筛选新的生物标记或分子标记用于鉴定尖镰孢专化型。进一步利用SSR引物分析了不同寄主尖镰孢菌株间的遗传关系，了解尖镰孢种内的遗传多样性，为枯萎病的防治提供一定的理论基础。主要研究结果如下:
　　1.从保定市各县采集豇豆、番茄、黄瓜、茄子、甜瓜、苦瓜、辣椒和笋瓜等8种植物枯萎病菌株150株，分离得到130株镰刀菌。利用形态学方法和尖镰孢特异引物FOF1/FOR1对镰刀菌进行鉴定，得到100株尖镰孢。
　　2.9种不同寄主共58株尖镰孢进行致病力测定，得到36株共7种专化型的尖镰孢菌株，包括:豇豆专化型（6株）、棉花专化型（6株）、番茄专化型（5株）、黄瓜专化型（4株）、茄子专化型（4株）、甜瓜专化型（6株）、马铃薯专化型（5株）。
　　3，测定7种专化型共36株尖镰孢的脂肪酸组成及含量，利用SPSS软件建立了4种脂肪酸标记模型:番茄专化型判别模型为Y1=-157.750+2.809 X1+3.391X2+8.099 X3;棉花专化型判别模型为Y2=-178.343+0.586X1+7.587X2-0.214X3;黄瓜专化型判别模型为Y3=-129.132+2.749X1+4.163X2+4.476X3;茄子专化型判别模型为Y4=-201.307+2.016X1+7.345X2+2.400X3。判别式中3个因子分别为C18∶1CIS9(W9)[X1]，C18∶2 CIS9，12/18∶0a[X2]和C18∶00[X3]。这4个专化型模型可用于鉴定番茄、棉花、黄瓜和茄子等尖镰孢专化型。
　　4.基于番茄专化型尖镰孢菌株(4287)基因组开发并设计出26对SSR引物，用不同专化型菌株进行验证，得到11对具多态性的SSR引物。
　　5.利用11对SSR引物分析60株不同寄主尖镰孢菌株的遗传多态性，发现不同寄主尖镰孢间存在明显的遗传分化。且SSR基因型与菌株对寄主的致病性之间具有相关性。

目录

声明

摘要

1 引言

1．1 尖镰孢的分布及危害

1．2 尖镰孢寄主专化型

1．3 尖镰孢不同专化型的鉴定方法概述

1．3．1 形态学鉴定方法

1．3．2 鉴别寄主致病力测定方法

1．3．3 尖镰孢营养体亲和群测定方法

1．3．4 分子标记鉴定方法

1．3．5 脂肪酸生物标记鉴定方法

1．4 本研究的目的和意义

2 材料与方法

2．1 试验材料

2．1．1 供试枯萎病植株

2．1．2 供试菌株

2．1．3 供试培养基

2．1．4 供试寄主品种

2．1．5 供试主要试剂及仪器设备

2．2 试验方法

2．2．1 病原菌分离及鉴定

2．2．2 致病力分化测定鉴定尖镰孢专化型

2．2．3 尖镰孢专化型脂肪酸标记鉴定方法的建立

2．2．4 尖镰孢不同专化型SSR标记鉴定方法的确立

2．2．5 利用SSR分子标记分析不同寄主尖镰孢的遗传多态性

3 结果与分析

3．1 不同寄主植物枯萎病原菌的采集、分离与鉴定

3．1．1 枯萎病原菌的采集分离与形态学鉴定

3．1．2 枯萎病原菌的分子鉴定

3．2 致病力测定方法鉴定尖镰孢专化型

3．2．1 尖镰孢寄主专化型的确定

3．2．2 不同专化型尖镰孢的交互侵染

3．3 脂肪酸标记方法鉴定尖镰孢专化型

3．3．1 尖镰孢脂肪酸种类及含量的统计

3．3．2 尖镰孢所含的主成分脂肪酸

3．3．3 根据主成分脂肪酸建立尖镰孢不同专化型的判别模型

3．4 尖镰孢不同专化型SSR标记鉴定方法的确立

3．4．1 尖镰孢基因组分析及SSR引物设计

3．4．2 利用SSR引物鉴定尖镰孢寄主专化型

3．5 利用SSR标记分析不同寄主尖镰孢的遗传多态性分析

4．讨论

4．1 尖镰孢专化型划分的复杂性

4．2 同一寄主上分离的尖镰孢有复杂的遗传多样性

4．3 本研究中三种鉴定方法的比较

4．4 尖镰孢SSR基因型与致病力之间的密切相关性

4．5 轮作对枯萎病的影响

5．结论

参考文献

在读期间发表的学术论文

作者简介

致谢