过氧化氢预处理对人脐带源间充质干细胞损伤的适应性保护作用

摘要

背景和目的： 人脐带源间充质干细胞(Human umbilical cord-derived mesenchymal stem cellshUC-MSCs)来源于脐带华通氏胶组织，可分化为多种类型的细胞，且具有取材方便无害，增殖快速，免疫原性低等优势，现作为治疗以细胞损害或丢失为特征疾病的理想种子细胞，尤其在心血管疾病的治疗方面取得了良好的效果。但损伤区缺血、缺氧、炎细胞侵润等因素，导致产生大量活性氧(reactive oxygen species ROS)，出现氧化应激状态，损害细胞活性，影响移植效果。过氧化氢(hydrogen peroxide H2O2)作为ROS最重要的一种，可通过多种途径损害细胞，但同时也可介导氧化应激预处理的保护作用。本研究即探讨氧化应激预处理对人脐带源间充质干细胞损伤的适应性保护作用。 方法： 人脐带源间充质干细胞从人脐带华通氏胶组织中分离出来后经体外培养、扩增纯化、冻存复苏、鉴定并绘制生长曲线;选取对数期的人脐带源间充质干细胞用不同浓度H2O2作用1h、12h，噻唑蓝(Methylthiazolyldiphenyl-tertrazolium bromide MTT)检测法检测细胞的代谢率;选取对数期的人脐带源间充质干细胞用10、20、50、100mmol/L H2O2预处理1h，恢复0h、12h、24h，用700、800、900mmol/L H2O2损伤12h，倒置显微镜观察细胞的形态，MTT法检测细胞的代谢率，血细胞计数板计数细胞。 结果： 从人脐带中分离出来的人脐带源间充质干细胞经体外培养、扩增纯化、冻存复苏，显微镜下细胞呈细长梭形样细胞，平行排列生长或旋涡状生长，冻存复苏后细胞活力基本无改变，经流式细胞仪鉴定培养的人脐带源间充质干细胞均一稳定的高表达人脐带源间充质干细胞特异性标志物CD29，CD44，几乎不表达造血干细胞特异性标志物 CD45，CD34，生长曲线示人脐带源间充质干细胞3-6天进入对数期;MTT法检测的细胞代谢率显示:H2O2呈浓度及时间依赖性诱导人脐带源间充质干细胞的损伤;倒置显微镜观察的细胞形态学，MTT法检测的细胞代谢率及血细胞计数板计数的细胞数均显示10、20、50、100mmol/LH2O2预处理减弱700、800、900 mmol/L H2O2引起的人脐带源间充质干细胞的损伤，且与预处理浓度和时间间隔有关。 结论： 低浓度短时间的H2O2预处理对高浓度长时间H2O2引起的人脐带源间充质干细胞损伤具有适应性保护作用，且需要适宜的预处理强度及适宜的时间间隔。

目录

声明

摘要

前言

第一部分 人脐带源间充质干细胞的分离与培养

1．材料

2．方法与步骤

3．结果

第二部分 氧化应激预处理对人脐带源间充质干细胞的保护作用

1．材料

2．方法与步骤

3．结果

讨论

小结

附图

参考文献

综述 心力衰竭与活性氧关系的研究进展

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