儿童持续性及慢性免疫性血小板减少症DNA甲基转移酶mRNA表达

摘要

背景：
　　免疫性血小板减少症(Immune thrombocytopenia, ITP)是儿童最常见的出血性疾病。按照病程分为新诊断ITP、持续性ITP、慢性ITP，新诊断ITP治疗效果好，但持续性及慢性ITP治疗效果差。ITP的具体发病机制迄今尚未完全阐明。
　　研究证实DNA甲基化异常参与了多种自身免疫性病、肿瘤等疾病的发生、发展。有学者研究发现成人ITP患者存在DNA低甲基化，且这种DNA低甲基化参与了ITP的发病。但鲜有关于DNA甲基化与儿童持续性及慢性ITP发病机制的关系的研究。
　　目的：
　　本研究通过逆转录-聚合酶链式反应(Reverse Transcription-Polymerase ChainReaction，RT-PCR)方法研究儿童持续性及慢性ITP DNA甲基转移酶(DNAmethyltransferase，DNMTs)mRNA表达，探讨DNA甲基化与儿童持续性及慢性ITP发病机制的关系。
　　方法：
　　1、研究对象根据2013年中华医学会儿科学分会血液学组制定的ITP诊断及分型标准，选取2014年1月-2015年1月期间于新乡医学院第一附属医院儿内一科住院和门诊治疗或随访的持续性及慢性ITP患儿25例作为实验组，同期选择门诊健康体检儿童20例作为对照组。实验组及对照组4周内均未应用叶酸、维生素B6、维生素B12。实验组及对照组年龄、性别无统计学差异。标本采集:无菌采集实验组及对照组空腹外周血2ml，EDTA抗凝。
　　2、测定DNMTs mRNA表达分离外周血淋巴细胞，Trizol法提取RNA，RT-PCR法测定DNMT1、DNMT3A、DNMT3B mRNA表达。
　　3、统计学处理采用SPSS16.0进行数据统计分析，计量资料以均数±标准差(x±S)表示，计数资料用百分比(％)表示;两样本均数比较采用独立样本t检验;计数资料采用卡方检验;DNMTs mRNA表达与临床资料之间的相关性分析采用Bivariate相关性分析，以P＜0.05为差异有显著性。
　　结果：
　　1、实验组PLT(36.2±19.6)×109/L，正常对照组PLT(168.8±46.8)×109/L，两组比较差异有统计学意义(t=-11.85，P=0.000)。
　　2、实验组及对照组DNMT1 mRNA表达分别为（0.17±0.05），(0.27±0.10)，实验组较对照组明显降低，差异有统计学意义(t=-3.912，P=0.001);实验组及对照组DNMT3AmRNA表达分别为(0.20±0.10)，（0.32±0.11），实验组较对照组明显降低，差异有统计学意义(t=-3.779，P=0.000);实验组及对照组DNMT3B mRNA表达分别为(0.16±0.11)，(0.31±0.11)，实验组较对照组明显降低，差异有统计学意义(t=-4.641，P=0.000)。
　　3、DNMT1与DNMT3B mRNA表达存在正相关性(r=0.433，P=0.031); DNMT3A与DNMT3B mRNA表达存在正相关性(r=0.721，P=0.000)。DNMT1与DNMT3AmRNA表达无相关性(r=0.277，P=0.180)。
　　4、DNMTs mRNA表达与年龄呈显著的负相关性(DNMT1:r=-0.565，P=0.003;DNMT3A: r=-0.563,P=0.003; DNMT3B: r=-0.506, P=0.01)。
　　5、DNMT1 mRNA表达在男性、女性组分别为(0.184±0.059)、(0.164±0.050)，不同性别表达水平无明显差异(t=0.948，P=0.353); DNMT3A mRNA表达在男性、女性组分别为(0.187±0.082)、(0.219±0.115)，不同性别表达水平无明显差异(t=-0.78，P=0.443); DNMT3B mRNA表达在男性、女性组分别为(0.123±0.106)、(0.182±0.116)，不同性别表达水平无明显差异(t=-1.29，P=0.210)。
　　结论：
　　1、儿童持续性及慢性ITP存在DNA低甲基化，这种DNA低甲基化可能参与发病机制;
　　2、在儿童持续性及慢性ITP的DNA甲基化过程中DNMTs可能起一定的协同作用;
　　3、DNMTs mRNA表达可能与年龄有关。

目录

声明

摘要

前言

1 材料与方法

1．1 研究对象

1．2 主要试剂与器械

1．3 实验方法

1．4 统计学处理

2 结果

2．1 一般资料

2．2 RNA凝胶电泳图

2．3 PCR产物凝胶电泳图

2．4 DNMTs mRNA表达水平

2．5 DNMTs mRNA表达之间的关系

2．6 DNMTs mRNA表达与临床资料的关系

讨论

小结

参考文献

综述 儿童免疫性血小板减少症发病机制的研究进展

附录

攻读学位期间发表文章情况

致谢