细胞因子诱导杀伤细胞联合p38抑制剂对食管癌细胞EC109的作用研究

摘要

食管癌是人类常见的恶性肿瘤。中国是食管癌高发国家，同时也是食管癌病死率最高的国家。食管癌致死率在我国位居第四位。食管癌一般发病隐匿，虽然对恶性肿瘤的早期诊断和早期治疗已有很大的进展，但食管癌患者的预后仍然较差，85％以上的病人由于在诊断时已是中晚期，2年生存率不超过15％。 细胞因子诱导杀伤（cytokine induced killer，CIK）细胞是最重要的过继性细胞免疫治疗手段之一，其对全身肿瘤细胞的清除作用及潜在的放射增敏效应日益受到关注。体内外研究表明，CIK细胞对食管癌有较好的抑制增殖作用。 有研究发现，p38丝裂原活化激酶（38kDa mitogen-activated protein kinase，MAPK）通路在细胞凋亡过程中起重要调控作用。P38抑制剂能够抑制食管癌细胞的增殖，而最近研究表明，p38抑制剂能够延长T细胞寿命，增强其活性。因此，基于p38抑制剂这种双重的生物学功能，其研究观察CIK细胞联合p38抑制剂对食管癌细胞的治疗效果，为提高CIK的临床治疗效果提供实验依据。 目的： 探讨CIK细胞联合p38抑制剂对食管癌细胞EC109的作用,并初步探讨其分子机制，为CIK联合p38抑制剂治疗食管癌提供理论依据。 方法： 常规分离健康人外周血单个核细胞并诱导为CIK细胞，流式细胞术检测其免疫表型；将实验细胞分为空白对照组（不做处理）、p38抑制剂组（加入p38抑制剂）、CIK组（加入培养14d的CIK细胞）、联合组（加入p38抑制剂联合培养14d的CIK细胞），乳酸脱氢酶释放法检测各组食管癌细胞EC109的存活率；流式细胞术检测各组食管癌细胞EC109的周期阻滞率和凋亡率；Western blot检测p38，p-p38、FAS、OX40蛋白的表达。 结果： 1.空白对照组、p38抑制剂组、CIK组及联合组EC109细胞存活率分别为100.0%、75.0%、50.0%、25.0%，后三组EC109细胞存活率均显著低于空白组（P＜0.05），联合组显著低于p38抑制剂组和CIK组（P＜0.05）； 2.四组食管癌细胞G1期的阻滞率分别为31.46%、42.04%、50.16%、72.02%，后三组EC109细胞对G1期的阻滞率均显著高于空白组（P＜0.05），联合组显著高于p38抑制剂组和CIK组（P＜0.05）； 3.四组食管癌EC109细胞凋亡率分别为7.15%、19.31%、42.15%及67.17%。后三组EC109细胞细胞凋亡率均显著高于空白组（P＜0.05），联合组显著高于p38抑制剂组和CIK组（P＜0.05）； 4.FAS、OX40在p38抑制剂组、CIK组、联合组中表达升高（P＜0.05）。 结论： CIK联合p38抑制剂对食管癌细胞EC109具有较强的杀伤作用。

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