SHARPIN蛋白调控乳腺癌p53泛素化降解的机制研究

摘要

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，也是女性第二大的肿瘤致死原因[1]。在国家女性中，乳腺癌每年的新增病例数占全世界的12.2%，而死亡病例数占全世界的9.6%[2]。虽然早期乳腺癌患者预后较好，但是晚期乳腺癌患者预后仍然很差，所以急需精准诊断的肿瘤标志物和特异性的靶点与药物。通过查询TCGA数据库得知，SHARPIN在乳腺癌组织中较正常乳腺组织高表达。而乳腺癌家族遗传史的女性病人往往存在p53、PTEN、BRCA1/2等基因的突变情况，所以明确这些基因对于乳腺癌的影响，对于寻找新的药物靶点，抑制乳腺癌的发生及发展有重要意义。 目的： 在乳腺癌细胞系中探讨SHARPIN对p53蛋白的作用机制，从而为寻找乳腺癌治疗新的药物靶点提供了新的思路。 方法： 1.运用TCGA和Kmplot数据库，查看SHARPIN在人乳腺癌患者组织中的表达及其与患者预后的关系。运用转录组RNA-seq测序探讨SHARPIN是否影响p53信号通路。 2.运用WST-1细胞增殖实验及EDU实验明确SHARPIN对乳腺癌细胞系增殖能力的影响。 3.用qRT-PCR和Western Blot明确SHARPIN对p53蛋白表达及其信号通路的影响。 4.用qRT-PCR、Western Blot、MG132、CHX等实验证明SHARPIN影响p53蛋白的翻译后修饰。 5.用免疫共沉淀实验、MG132实验及CHX实验寻找并证明SHARPIN间接调控p53蛋白稳定性的“中间桥梁”。 6.用MG132实验、CHX实验明确SHARPIN对MDM2蛋白稳定性的影响。 结果： 1.SHARPIN在乳腺癌组织中高表达，且与p53野生型乳腺癌患者不良预后有一定关联。RNA-seq结果证明沉默SHARPIN可以影响p53靶基因的表达。 2.SHARPIN沉默后的乳腺癌细胞增殖能力下降。 3.SHARPIN沉默可上调p53信号通路活性。 4.SHARPIN影响p53蛋白的翻译后修饰。 5.SHARPIN依赖MDM2影响p53蛋白的稳定性。 6.SHARPIN可以增加MDM2蛋白稳定性。 结论： 在乳腺癌细胞中，SHARPIN可以依赖MDM2调控p53蛋白的泛素化降解，从而影响p53蛋白稳定性。

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