肺气虚证与肺阴虚证患者T淋巴细胞基因表达的对比研究

摘要

目的：通过基因芯片研究肺气虚证和肺阴虚证患者T淋巴细胞基因表达的差异，从基因分子水平阐述肺气虚证与肺阴虚证的物质基础和科学内涵。 方法：采集肺气虚证、肺阴虚证患者和正常人的外周血作为实验血样和对照血样。用Ficoll技术分离外周血淋巴细胞,然后用流式细胞仪分选并纯化T细胞，并采用一步法提取总RNA,逆转录合成cDNA探针,荧光染料标记后,采用人类全基因表达谱芯片进行芯片杂交,扫描后筛选出差异表达基因。 结果: ①肺气虚证/正常人外周血T细胞相关差异表达基因45条,其中上调41条，下调4条；②肺阴虚证/正常人差异表达基因32条,其中上调19条，下调13条；③肺气虚证/肺阴虚证差异表达基因42条,其中上调27条,下调16条；④肺气虚证、肺阴虚证/正常人均高表达的差异基因5条；⑤肺气虚证组/正常人组和肺气虚证组/肺阴虚证组均高表达的差异基因15条。 结论 1.基因芯片技术能有效地研究中医证的基因表达谱，利用该技术研究肺系疾病相关证候本质的方法是可行的。 2.肺气虚证与肺阴虚证的T细胞相关差异表达基因改变涉及免疫、酶、核酸合成、细胞凋亡、结构蛋白、细胞周期调节、运输、离子通道、信号传导等多方面，主要为免疫蛋白、酶和运输相关基因,肺气虚证和肺阴虚证实质涉及T细胞的基因表达谱改变。 3.肺气虚证与肺阴虚证T细胞相关差异表达基因的变化有很大不同，反映了这两种病证类型存在本质的差异，但同时它们之间也有共同的基因表达谱改变，如PF4、IGKC、DEFA1、GNLY、 HLA等基因表达有显著差异，其中PF4基因表达下调,IGKC、DEFA1、GNLY、 HLA基因表达上调，表明两证具有共性的免疫基因组学基础和证候间内在的联系, 是诸多相关基因异常表达的综合结果。 4. 肺气虚证组和肺阴虚证组均高表达的5条差异基因中，与血红蛋白运输有关的3条基因为HBB、 HBA1 、HBA2；而与运输有关基因TXNDC5在肺气虚证组高表达，在肺阴虚证组低表达，其异常表达均可能导致血红蛋白运输障碍。本课题首次从基因分子水平初步探讨了所选COPD患者肺气虚证型、肺阴虚证型都有不同程度的低氧血症的物质基础和科学内涵。 5.肺气虚证组、肺阴虚证组分别发现HLA- DQB1和 HLA-DRB4两条基因，其高表达导致异常免疫应答, 使维持机体内环境稳定的T细胞各亚群的比例失调,进而导致CD4调节的B淋巴细胞成熟、分化的过程发生障碍,从而导致对外感疾病的抵抗能力减弱,增加了对外感疾病的易感性。