滚环扩增阳离子共轭聚合物均相检测microRNA

摘要

microRNA（miRNA）是一种长度一般在20-24个核苷酸左右的非编码小分子RNA，它在基因调控和表达中起着重要作用。由于它在生物个体发育分化等生命活动中有着重要调节作用，因此对miRNA的检测在研究生物功能和临床诊断等方面具有重要意义。本论文应用滚环扩增技术结合阳离子共轭聚合物均相检测，提出了一种在均相溶液中进行microRNA检测的新方法。设计的锁式探针（PLP）与目标分子miRNA-221两侧序列完全互补，然后在T4RNA连接酶2的作用下，PLP探针首尾相接被连接成环。随后目标分子miRNA-221可直接作为引物，以环形PLP探针为模板在Phi29DNA聚合酶作用下引发滚环扩增反应，生成上万个碱基的DNA单链产物。随后在扩增产物中加入与其互补的荧光标记探针，并使其充分杂交。未杂交的荧光标记探针应用核酸外切酶I降解为单核苷酸分子。当加入阳离子共轭聚合物时，由于阳离子共轭聚合物和DNA链之间很强的静电吸引作用，在二者之间会产生高效率的荧光共振能量转移（FRET）。通过测量共轭聚合物荧光发射强度的变化，在均相溶液中实现了microRNA检测。该方法对于miRNA-221检测的线性范围为0.5-20pmol/L，检测限为0.2pmol/L。

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第 1 章 引 言

1.1 microRNA 检测扩增技术

1.2 共轭聚合物

1.3 本文研究的内容及意义

第 2 章 滚环扩增阳离子共轭聚合物均相检测 microRNA

2.1 前言

2.2 实验部分

2.3 结果与讨论

2.4 本章小结

参考文献

致谢

攻读学位期间取得的科研成果