检测端粒酶活性对肿瘤、癌症的早期诊断,以及开发以端粒酶为靶标分子的抗肿瘤、抗癌药物具有重要意义.本研究基于阳离子共轭聚合物Poly[(9,9-bis(6'-N,N,N-trimethylammonium)hexyl)fluorenylene phenylene(PFP)与荧光染料SYBR Green I(SG)之间的荧光共振能量转移,建立了一种简单快速的端粒酶活性检测方法.当端粒酶存在时,引物探针被延伸,生成具有-(GGTTAG)n重复序列的DNA.然后通过链霉亲合素与生物素的特异性作用将端粒酶延伸产物连接在磁性微球上.加入与端粒酶延伸产物匹配的探针-(CTAACC)2.端粒酶延伸产物形成双链结构之后加入SG,SG能够特异性的嵌入到DNA双链结构中.最后,加入PFP.PFP是一种带有正电荷的水溶性共轭阳离子聚合物,可以通过静电作用与双链DNA发生吸附.PFP与嵌入在双链结构中的SG发生荧光共振能量转移(FRET).根据FRET的效率可以实现对端粒酶活性的定量检测.本方法可以检测到3.0×105个Hela细胞中提取的端粒酶活性.将本方法与杂交链式反应(HCR)反应结合,可实现检测信号的放大,提高检测的灵敏度,可以检测到6.0×104个Hela细胞中的端粒酶活性,灵敏度提高了一个数量级.本方法简单、快速,无需标记、扩增过程,无酶参与,检测成本低,灵敏度高.
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